HE染色不管怎么操作,始終無法染色或淡染答:這種情況一般因為組織固定時采用了酸性甲醛;或者組織在甲醛中浸泡時間太長;或者久置的甲醛變性分解為甲酸,。補救:防患于未然,,要么使用新鮮的中性甲醛固定,要么在存放的甲醛中加一點碳酸鈉中和甲酸,。對于已經(jīng)固定的組織可考慮再次固定,;對于已經(jīng)制出的片子,染色前采用5%重鉻酸鉀溶液浸泡半小時以上,,然后自來水漂洗5min,,可改善染色。也可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中,,補充染色媒介,,增強蘇木素與組織的親和力(蘇木素染色必須要媒介才能染上,單純的蘇木素與組織的親和力很弱),。HE染色中固定液如何配置,。廣西靠譜的HE染色多少錢
HE染色原理:易于被堿性或酸性染料著色的性質稱為嗜堿性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia);而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性(neutrophilia),。構成組織內(nèi)蛋白質的氨基酸的種類很多,,它們有不同的等電點。在普通染色法中,,染色液的酸堿度為pH6左右,,細胞內(nèi)的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經(jīng)細胞內(nèi)的粗面內(nèi)質網(wǎng)及透明軟骨基質等均被堿性染料染色,,這些物質稱為嗜堿性,。而細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,,這些物質稱為嗜酸型,。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度,pH值升高時,,則原來被酸性染料染色的物質可變?yōu)槭葔A性,;pH值降低時,原來被堿性染料染色的物質則可變?yōu)槭人嵝浴K哉f染色液的pH值可以影響染色的反應,。脫氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,,帶負電荷,呈酸性,,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結合而被染色,。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色,。云南質量好的HE染色外包比較基礎的病理染色HE染色,。
HE染色石蠟和冰凍切片樣本的處理,樣品處理:a.對于石蠟切片:二甲苯中脫蠟5-10分鐘;換用新鮮的二甲苯,,再脫蠟5-10分鐘;無水乙醇5分鐘;90%乙醇2分;70%乙醇2分鐘;蒸餾水2分鐘.b.對于冰凍切片:蒸餾水2分鐘,。c對于培養(yǎng)細胞:用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。蒸餾水洗滌2分鐘,。換用新鮮的蒸餾水,,再洗滌2分鐘。蘇木素伊紅(HE)染色對于上述處理好的樣品:蘇木素染色液染色5-10分鐘(可以根據(jù)染色結果和要求調(diào)整時間),。浸自來水中沖洗去多余的染色液,,約10分鐘。蒸餾水再洗滌一遍(數(shù)秒鐘),。95%乙醇5秒,。伊紅染色液染色30秒-2分鐘(可以根據(jù)染色結果和要求調(diào)整時間)。此時,,如果需要直接觀察,,可以用70%乙醇洗滌2次。如需脫水,、透明后封片按后續(xù)步驟進行,,70%乙醇洗滌后仍可按照后續(xù)步驟進行脫水、透明和封片處理,。
HE染色結果判讀:細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色,。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,,紅血球呈橘紅色,,蛋白性液體呈粉紅色。著色狀況與組織或細胞的種類有關,也隨其生活周期及病理變化而改變,。例如,,細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染,。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時,,伊紅著色由淺變深。H-E染色評定標準:(1)切片完整,,厚度4-6微米,,厚薄均勻,無皺褶無刀痕,;(2)染色核漿分明,,紅藍適度,透明潔凈,,封裱美觀,。HE染色 ,石蠟切片技術里常用的染色法之一。
HE染色等常規(guī)染色,,組化或是熒光優(yōu)先推薦做石蠟切片,。原因:石蠟切片對組織的形態(tài)保存比冰凍切片好,并且對抗原基本無影響,。脂質染色(油紅O染**odipy染色,,尼羅紅染色)必須做冰凍切片,不能做石蠟切片,。以下染色必須要新鮮或冷凍組織冰凍切片:ROS染**-半乳糖甘酶染色,,ATP染色,膽固醇染色,。如果標本已經(jīng)放在-80°冰箱冷凍了之后又想要做石蠟切片,,將標本取出來千萬不要解凍直接放于固定液內(nèi)固定(在固定液內(nèi)邊解凍邊固定)。組織形態(tài)結構保存完好順序:新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>組織-80°冷凍后投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定冰凍切片>組織-80°冷凍后直接冰凍切片,。HE染色觀察細胞形態(tài)變化,。吉林專業(yè)的HE染色多少錢
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HE染色主要是為通細胞及胞核形態(tài),、大小來區(qū)別各種細胞的,并不是直接通過顏色來區(qū)分的,,HE染色細胞壞死的三種改變:(1)細胞核的改變:這是細胞壞死的主要形態(tài)標志,,表現(xiàn)為核濃縮,核碎裂,,核溶解,。(2)細胞質的改變:由于胞質發(fā)生凝固或溶解,,HE染色呈深紅色顆粒狀,如肝細胞壞死出現(xiàn)的嗜酸性小體醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理,。(3)間質的改變:由于各種溶解酶的作用,,基質崩解、膠原纖維腫脹,、斷裂或液化,,與壞死的細胞融合成一片,呈紅染的顆粒狀無結構物質,。南京英瀚斯生物廣西靠譜的HE染色多少錢
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