HE染色法,,。蘇木精染液為堿 ,,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色 ,;伊紅為酸染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色,。而線粒體用HE染色不可見,活細胞通常要求活細胞近似無色線粒體需要用健那綠來染色,,再在高倍鏡下觀察,。從人或動物新鮮尸體上取下塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使,、細胞的蛋白質變凝固,,以防止細胞后的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態(tài)結構,。一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,,逐漸脫去塊中的水份。再將塊置于既溶于酒精,,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,,以二甲苯替換出塊的中酒精,才能浸蠟包埋。HE染色取材和樣本保存方式,。寧夏比較好的HE染色多少錢
HE染色結果判讀:細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,,粘液呈灰藍色,。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色,。膠原纖維呈淡粉紅色,,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,,蛋白性液體呈粉紅色,。著色狀況與組織或細胞的種類有關,也隨其生活周期及病理變化而改變,。例如,,細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染,。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時,,伊紅著色由淺變深。H-E染色評定標準:(1)切片完整,,厚度4-6微米,,厚薄均勻,無皺褶無刀痕,;(2)染色核漿分明,,紅藍適度,透明潔凈,,封裱美觀,。青海病理HE染色檢測冰凍組織切片的HE染色,。
HE染色常見問題:切片染色不均勻,有片狀的弱著**存在答:(1)取材時組織太厚,,固定過久,,導致深部組織固定不佳,而表淺組織過度固定,,而透明、脫水,、浸蠟均是如此,,這樣在后期染色時就會出現(xiàn)染色不均勻,。應該將厚的組織剖開固定,。(2)制片過程有問題,,切片厚薄不一,,或者有刀痕,或組織與玻片間存在氣泡,。同一張切片厚薄不一,,一般都是在制片時,,刀片固定不佳或刀片鈍或刀片與組織角度不佳(一般比較好角度為5°)(3)脫蠟前未烘烤,,脫蠟時間過短或脫蠟液使用過久,,導致脫蠟不徹底。(4)染色液過少,,著色不均勻,;或染色時部分組織干涸而另一部分濕潤,,這樣會導致組織吸附染料的能力不一,。(5)分化不當。南京英瀚斯,,專業(yè)的病理染色實驗服務平臺,。
HE染色實驗步驟:(1)樣品制備:對于貼壁生長細胞,胰酶消化,,調整細胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),,培養(yǎng)相應時間后,,取出細胞爬片,用PBS洗滌3次,。(2)樣品固定:95%乙醇固定20min,,PBS洗滌2次,,每次1min。(3)染核:蘇木素染液染色2-3min,,自來水洗滌,。(4)分色:鏡下觀察,若細胞核染色過深,,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,,自來水洗滌,。(5)染胞質:浸入伊紅染液染色1min,,自來水洗滌。(6)吹干或自然晾干細胞爬片后,,中性樹膠封片,。若細胞用4%多聚甲醛固定,,則染色時間相應延長,蘇木素染色12-15min,,伊紅5min即可什么是HE染色,HE染色實驗的目的,。
HE染色攻略:HE染色又稱為蘇木精-伊紅染色,染色后組織或細胞可以借助普通光學顯微鏡觀察與鑒別細胞凋亡與細胞壞死的一種染色方法,。這種方法適用范圍***,,對組織細胞的各種成分都可著色,,便于***觀察組織構造,,而且適用于各種固定液固定的材料,,染色后不易褪色可長期保存,。經過HE染色,細胞核被蘇木素染成藍紫色,,細胞質被伊紅染色呈粉紅色??梢杂^察細胞結構,、組織層次等等。首先切片組織是否完整,,組織有無損傷,;然后看切片有無刀痕,;***細胞核是否清晰可見,,胞核與包漿要對比鮮明。HE染色小攻略技巧分析,。青海病理HE染色檢測
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HE染色切片中出現(xiàn)類似色素樣的點狀結晶和黑色光滑的細胞核原因:切片封片前放置在空氣中時間太長,,以至于二甲苯揮發(fā)切片干燥所致,。對策:移去組織切片上的蓋玻片和封固劑,,重新處理,。將切片水洗數(shù)分鐘,,然后重新脫水,、透明、封固,。封片過程中要保持組織切片的輕度濕潤,,盡量不要讓其干燥,。細胞核呈紅、棕色改變原因:蘇木精染色液過度氧化和切片在蘇木精染液染色后返藍不足,。對策:首先,,每次染色之前檢查蘇木精染色液的染色能力,發(fā)現(xiàn)氧化過度應及時更換,。其次,,可用流水、溫水或弱堿性溶液如稀氨水,、0.2%碳酸氫鈉等,,在蘇木精染色后,給切片以足夠的藍化時間,。寧夏比較好的HE染色多少錢
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