HE染色注意事項:1、染色時調(diào)節(jié)pH值很重要,。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,,組織酸化而影響細(xì)胞核著色,。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,,這樣可以使細(xì)胞核著色較深,。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸,。2,、切片染蘇木精后,分色這一步是關(guān)鍵,,應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行,,一般以細(xì)胞核染色清楚(晰)而細(xì)胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導(dǎo)致染色太淺,,應(yīng)重新染色后再行分色,。3、切片經(jīng)酒精脫水后,,入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài),,此為脫水不徹底,應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精,,更換酒精,、二甲苯,以求徹底脫水與透明,。4,、在染色過程中不要讓切片干燥,以免切片收縮,、變形,,影響神經(jīng)元形態(tài)。5,、切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前,,切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。6,、***封固時,,要用中性樹脂,防止日后褪色,,蓋片要選大于組織塊的面積,,如漏出一部分不久將會褪色,所用樹脂濃度要適當(dāng),,樹脂封固時不能有氣泡,。HE染色注意事項以及常規(guī)的流程解析。海南病理HE染色檢測
HE染色脫蠟不凈的原因及驗證方法:1)二甲苯使用過久,含蠟成分太高或脫蠟效果差:可更換二甲苯驗證,。2)切片經(jīng)烤片,,冷卻后放入二甲苯脫蠟或室溫太低;延長拖拉時間或用熱的切片脫蠟驗證,。3)脫蠟時間太短或振蕩太少,,幅度太小,;可延長脫蠟時間或以多振蕩來驗證,。4)洗滌二甲苯用的乙醇使用時間過久,導(dǎo)致乙醇中二甲苯含量過高,,二甲苯殘留在切片上(由于二甲苯與水不相溶,,切片上有二甲苯的地方,蘇木精就沒有辦法滲透進(jìn)去,,在切片染色完成后留下了點狀的不著**域):更換各道乙醇驗證,。5)二甲苯、乙醇質(zhì)量不佳(偶有試劑瓶內(nèi)裝的試劑與試劑名不相符):換批號驗證,。6)更換脫蠟液體時試劑拿錯:需重新配置驗證,。7)更換脫蠟液體時試劑次序放錯:需重新配置驗證。8)烤片時間短,,切片上水分沒有烤干,也會導(dǎo)致著色不勻,,出現(xiàn)點狀發(fā)白區(qū)域,。海南質(zhì)量好的HE染色報告HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
HE染色法的話,,不能準(zhǔn)確說出細(xì)胞器的顏色,,實驗記錄或考試時只能說染色效果為 :細(xì)胞核藍(lán)色,胞質(zhì),、肌纖維,、膠原纖維和紅細(xì)胞呈深淺不一的紅色?;蛘咴敿?xì)說明如下:細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,,粘液呈灰藍(lán)色,。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色,。膠原纖維呈淡粉紅色,,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色,。蘇木精染液為堿性 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ,;伊紅為酸性染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。
HE染色:在組織病理學(xué)中,,蘇木素-伊紅染色是一種日常使用比較普遍的常規(guī)染色方法,。常規(guī)蘇木素染色的對比染色是用伊紅,也有采用焰紅,,因為焰紅比伊紅色澤更鮮明,,還有采用橘黃G,比布里希猩紅,,波爾多紅等作為對比染色,。伊紅是比較常用的胞質(zhì)染料,本身溶于醇而不溶于水,,為磚紅色粉末狀或醬紅色結(jié)晶,。配方:伊紅Y(水溶)0.5-1g,蒸餾水99ml,。如果取用伊紅Y(醇溶性)應(yīng)當(dāng)溶于99ml 75%或95%的乙醇中,。如果在伊紅液中加入0.5ml冰醋酸,可以加速其染色過程,,使得胞質(zhì)的色澤更加艷麗,。結(jié)果是細(xì)胞核呈藍(lán)色,胞質(zhì),、肌肉,、結(jié)締組織、紅細(xì)胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色,。鈣鹽和各種微生物也可染成藍(lán)色或紫藍(lán)色,。科研常備實驗操作之HE染色,。
HE染色不管怎么操作,,始終無法染色或淡染答:這種情況一般因為組織固定時采用了酸性甲醛;或者組織在甲醛中浸泡時間太長;或者久置的甲醛變性分解為甲酸。補(bǔ)救:防患于未然,,要么使用新鮮的中性甲醛固定,,要么在存放的甲醛中加一點碳酸鈉中和甲酸。對于已經(jīng)固定的組織可考慮再次固定,;對于已經(jīng)制出的片子,,染色前采用5%重鉻酸鉀溶液浸泡半小時以上,然后自來水漂洗5min,,可改善染色,。也可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中,補(bǔ)充染色媒介,增強(qiáng)蘇木素與組織的親和力(蘇木素染色必須要媒介才能染上,,單純的蘇木素與組織的親和力很弱),。關(guān)于HE染色,常用的結(jié)果分析原理,。湖北推薦的HE染色價格
心臟組織HE染色如何觀察,。海南病理HE染色檢測
HE染色原理:一、細(xì)胞核染色原理:蘇木精為堿性天然染料,,可使細(xì)胞核著色,。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA,在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,。使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷,呈酸性,,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色,。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色,。二,、細(xì)胞漿染色原理:細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物,、細(xì)胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系,,當(dāng)pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點4.7-5.0時,胞漿對外不顯電性,,此時酸或堿性染料不易染色,。當(dāng)pH調(diào)到6.7-6.8時,大于蛋白質(zhì)的等電點pH值,,表現(xiàn)酸性電離,,而帶負(fù)電荷的陰離子,,可被帶正電荷的染料染色,,現(xiàn)時胞核也被染色,核和胞漿難以區(qū)分,。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點以下,,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負(fù)電荷(陰離子)的染料染色,。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,,在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷(陽離子)結(jié)合而使細(xì)胞漿染色,,細(xì)胞漿,、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織,,嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色,,與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對比海南病理HE染色檢測
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