細胞爬片免疫組化檢測實驗步驟

1、選擇貼壁良好的細胞爬片,，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干,。

2,、PBS洗3次，每次5min,。3,、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min,，以阻斷內源性過氧化物酶,。

4、PBS洗3次,，每次5min,，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

5,、去除BSA液,，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜,。

6,、PBS洗3次，每次5min,。

英瀚斯生物,，細胞、動物,、臨床樣本免疫組化檢測都可完成,！

7、去除PBS液,，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗,，4℃孵育50min。

8,、PBS洗3次,，每次5min。

9,、去除PBS液,，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色,。

10,、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗,，蘇木素復染,，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗,，氨水返藍,，流水沖洗,。

11、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度,，脫水干燥,，二甲苯透明，中性樹膠封固,。 免疫組化的那些小知識,，都在這里！四川什么是免疫組化要多久

免疫組化實驗流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結免疫組化詳細步驟：

1,、SP三步法

1）石蠟切片,，常規(guī)脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘,，以滅活內源性過氧化物酶活性,。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復：微波（建議30分鐘內4次中火）,、高壓,、酶修復方法。自然冷卻,，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘,，盡可能與二抗來源一致。傾去,，勿洗,。

6）滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（比較好復溫）,。PBS沖洗,，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標記的二抗,，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8）PBS沖洗,，3分鐘×5次,。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h,。

10）PBS沖洗,，3分鐘×5次。

11）顯色劑顯色（DAB等）,。

12）自來水充分沖洗,。

13）可進行復染，脫水,，透明,。

14）選擇適當的封片劑封片,。 四川什么是免疫組化要多久做免疫組化需要多少錢？

免疫組化的DAB顯色時間如何把握,？

1,、DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間,，到出現淺棕色本底時即可沖洗,；

2、DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現很深的棕褐色,，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長,，需要下調抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；

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3、此外,，若很短時間就出現背景很深,，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間,；

4,、DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4度過夜）,；另一方面就是封閉時間過長,。

免疫組化染色呈陰性結果的原因有哪些？

1,、抗體濃度和質量問題以及抗體來源選擇錯誤,。不是抗體濃度越高就越易出現陽性結果，抗原抗體反應有前帶和后帶效應,，必須摸索比較好濃度,。

2、抗原修復不全,，對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復來打開抗原表位,，以利于與抗體結合；建議微波修復用高火4次*6min試試,。有人做過實驗,，這是比較好的時間和次數。若不行,，還可高壓修復,。

3、組織切片本身這種抗原含量低,。

4,、血清封閉時間過長,。

5、DAB孵育時間過短,。

6,、細胞通透不全，抗體未能充分進入胞內參與反應,。

7,、開始做免疫組化，建議一定要首先做個陽性對照片,，排除抗體等問題,。 關于免疫組化，你想知道的都在這里,！

英瀚斯生物為您整理免疫組化實驗步驟

1,、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h，脫蠟至水,，用PBS沖洗三次,，每次5min。

2,、切片置于EDTA緩沖液中微波修復,，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸,。

3,、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min,。4,、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min,，以阻斷內源性過氧化物酶,。

5、PBS洗3次,，每次5min,，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

6,、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,，4℃過夜,。

7、PBS洗3次,，每次5min,。

8,、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗,，4℃孵育50min,。

9、PBS洗3次,，每次5min,。

10、去除PBS液,，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,，顯微鏡控制顯色。

11,、顯色完全后,，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染,，1%鹽酸酒精分化（1s）,，自來水沖洗，氨水返藍,，流水沖洗,。

12、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度,，脫水干燥,，二甲苯透明，中性樹膠封固,。 免疫組化方法步驟是什么,？四川什么是免疫組化要多久

英瀚斯生物，可做免疫組化定量分析,。四川什么是免疫組化要多久

免疫組化技術應用于臨床cancer良惡性的判斷,，英瀚斯生物為您介紹。對于反應性增生還是cancer性增生,，可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測B淋巴細胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別,。在濾泡反應性增生時，濾泡反應中心的細胞不表達細胞凋亡蛋白(bcl-2),，bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中,，由于90%以上cancer性濾泡細胞有bcl-2的高表達，bcl-2陽性,。而增殖細胞核抗原(PCNA),，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通過對cancer細胞增生的程度作出評價，從而提示增生細胞的良惡性,。四川什么是免疫組化要多久