病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說的一句話應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”,;不管是臨床醫(yī)師,還是患者,他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化,?”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進(jìn)行細(xì)胞的識(shí)別,。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同,、則化學(xué)性質(zhì)不同,,通過染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過,,由于組織固定或儲(chǔ)存等,,會(huì)造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失,因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用,。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展,,根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì),,則有了現(xiàn)在免疫組化的方法:不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異,,抗體與被測(cè)組織中的特定抗原結(jié)合,,進(jìn)而通過一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來。如有相應(yīng)顯色,,則證實(shí)可能有被測(cè)抗原,;無顯色則可能無被測(cè)抗原。當(dāng)然,,這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”,,如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色,,則容易造成“假陽性”,;或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等,,則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加,,這些問題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免,,前者如各種顯色方法的優(yōu)化;后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化,、新型抗體開發(fā)及選擇,。做免疫組化意味什么?黑龍江免疫組化可以做什么
免疫組化的局限性,,可能會(huì)有假陽性,。陽性信號(hào)定位不正確即為假陽性,包括著色不勻,、背景著色,、邊緣效應(yīng),另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽性結(jié)果,。假陽性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷?,抗體有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用,過期的抗體或者不著色,,或者背景著色,,形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織,組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過長,,由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短,,冬季孵育時(shí)間稍長;(4)操作過程中組織變干,造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,,產(chǎn)生假陽性;(5)3,,3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長,,DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),,因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色,,如內(nèi)源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色,,可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中,使壞死組織呈較高的背景染色,,在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊,。江蘇小鼠免疫組化要多久免疫組化如何得到好的效果?
免疫組化分類中免疫酶標(biāo)方法,,英瀚斯生物為您介紹,。免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來的技術(shù),?;驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,,通過光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究,。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前定位準(zhǔn)確,、對(duì)比度好、染色標(biāo)本可長期保存,,適合于光,、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,,已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,,目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬***法(過氧化物酶-抗過氧化物酶)、ABC法(卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物),、SP法(鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶),、即用型二步法(聚合物鏈接)等。
免疫組化有哪幾種分類 ,?
1)按標(biāo)記物質(zhì)的種類,,如熒光染料、放射性同位素,、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶),、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法,、放射免疫法,、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。
2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步,、三步或多步法),。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多,。
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3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(***)法,;親和連接,如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法,、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法等,,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,,如即用型二步法,,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。 英瀚斯生物免疫組化,,高效高質(zhì)量出結(jié)果,。
免疫組化的局限性。靈敏度高,、精確性和特異性是一種理想的cancer標(biāo)記物必須具有的,但至今所發(fā)現(xiàn)的cancer標(biāo)記物還沒有能完全滿足這些標(biāo)準(zhǔn),。某些正常細(xì)胞也分泌一些cancer標(biāo)記物,,因此cancer細(xì)胞學(xué)并不是單獨(dú)產(chǎn)生一種標(biāo)記物,即選用一組抗體比單一抗體更有利,。在cancer診斷中評(píng)估免疫組化的局限性主要在抗體特異性和解釋方面,。在免疫組化操作中都必須有適當(dāng)?shù)年栃耘c陰性對(duì)照,作為技術(shù)完整性質(zhì)量控制,,如對(duì)照組被忽略或不理想時(shí),,免疫組化染色的結(jié)果要謹(jǐn)慎對(duì)待,免疫組化的正確結(jié)果不僅要依靠技術(shù)步驟上規(guī)范化操作,,而且有賴于正確的解釋,,在報(bào)告免疫組化染色結(jié)果時(shí)不應(yīng)孤立地解釋,應(yīng)考慮到診斷與鑒別診斷,、所應(yīng)用的抗體特性,、所研究組織性質(zhì),同時(shí)還要注意假陽性與假陰性結(jié)果的干擾,。南京有靠譜的能做免疫組化的公司嗎,?江蘇靠譜免疫組化怎么樣
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確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位,臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作,。對(duì)于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤,,用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來源,進(jìn)一步確定原發(fā)部位,。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer,、膽管cancer、胰腺cancer中陽性,,而在肺cancer,、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動(dòng)蛋白(Actin),、肌球蛋白(Myosin),、結(jié)蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù),。黑龍江免疫組化可以做什么
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