免疫組化的結(jié)果分析：

免疫組化實(shí)驗(yàn)通常需要設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,、陰性對(duì)照（或替代對(duì)照）（陽(yáng)性對(duì)照是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無(wú)問(wèn)題,；陰性對(duì)照與替代對(duì)照是排除有無(wú)非特異性染色）。一般情況下,，陽(yáng)性對(duì)照顏色的特點(diǎn)為：Ag定位,，包漿、胞核,、胞膜,、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。且染色的強(qiáng)度不同（顏色深淺不一）,；陰性對(duì)照的特點(diǎn)為：染色細(xì)胞與組織無(wú)區(qū)別,，顏色具有彌散性，分布均勻,。

英瀚斯生物可承接各類(lèi)病理染色,，包括免疫組化。

說(shuō)明：免疫組化實(shí)驗(yàn)可以對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析,，但要實(shí)驗(yàn)得到的必須是高質(zhì)量的染色切片,，要求背景染色淺且特異性染色較深,，這樣分析的結(jié)果才會(huì)比較準(zhǔn)確。 動(dòng)物,、細(xì)胞的免疫組化,、免疫熒光，就找英瀚斯生物,！甘肅做得好的免疫組化推薦

免疫組化的DAB顯色時(shí)間如何把握,？

1、DAB顯色時(shí)間不是固定的,，主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間,，到出現(xiàn)淺棕色本底時(shí)即可沖洗；

2,、DAB顯色時(shí)間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色,，這很可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)高或抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間,；

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3,、此外,，若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,，需要延長(zhǎng)封閉時(shí)間,；

4、DAB顯色時(shí)間很長(zhǎng)（如超過(guò)十幾分鐘）才出現(xiàn)陽(yáng)性染色,，一方面可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短（比較好一抗4度過(guò)夜）,；另一方面就是封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。 甘肅做得好的免疫組化推薦免疫組化失敗的原因,？

關(guān)于免疫組化的封閉：用和二抗來(lái)源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min,，然后甩去封閉用血清，勿洗,；注意：封閉時(shí)間根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整,；封閉液一般選用5%BSA或與二抗來(lái)源一致的血清，切記是BSA,，不是PBS.很多論壇寫(xiě)的是PBS,太坑了,。①使用血清好還是BSA好？答：***是待檢樣本會(huì)非特異性的和蛋白結(jié)合,，從而導(dǎo)致背景過(guò)高,，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合，從這點(diǎn)看,，BSA和血清沒(méi)有明顯區(qū)別,。第二是待檢樣本中可能會(huì)有Fc受體,，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，與抗體特異性無(wú)關(guān),，封閉血清中有抗體,，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無(wú)法封閉Fc受體,。

病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說(shuō)的一句話(huà)應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”,；不管是臨床醫(yī)師，還是患者,，他們問(wèn)的多的問(wèn)題則是“為什么要做免疫組化,？”病理醫(yī)師通過(guò)“特殊染色”來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的識(shí)別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同,、則化學(xué)性質(zhì)不同,，通過(guò)染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色,。不過(guò),，由于組織固定或儲(chǔ)存等，會(huì)造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失,，因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用,。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展，根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì),，則有了現(xiàn)在免疫組化的方法：不同細(xì)胞,、不同組織中抗原有一定差異，抗體與被測(cè)組織中的特定抗原結(jié)合,，進(jìn)而通過(guò)一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來(lái),。如有相應(yīng)顯色，則證實(shí)可能有被測(cè)抗原,；無(wú)顯色則可能無(wú)被測(cè)抗原,。當(dāng)然，這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”,，如抗體的非特異性結(jié)合,、非特異性顯色，則容易造成“假陽(yáng)性”,；或者雖有相關(guān)抗原,、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等，則容易造成“假陰性”,。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加,，這些問(wèn)題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免，前者如各種顯色方法的優(yōu)化,；后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化,、新型抗體開(kāi)發(fā)及選擇,。英瀚斯生物實(shí)驗(yàn)外包，多種病理染色熟練掌握,，可做免疫組化,！

免疫組化的抗原修復(fù)

很多抗原的可視性可以通過(guò)抗原修復(fù)來(lái)提高，抗原修復(fù)可以打破福爾馬林固定時(shí)形成的蛋白質(zhì)交聯(lián),，從而使被掩藏的抗原顯現(xiàn)出來(lái),。抗原修復(fù)技術(shù)包括不同時(shí)間長(zhǎng)度的加熱或者利用蛋白酶來(lái)做酶消化,，例如蛋白酶K,，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加熱的方法通常會(huì)用到微波爐,，高壓鍋,，蒸箱或水浴。將樣品在接近100°C高溫加熱20分鐘后再冷卻同等的時(shí)間,。**常用的抗原修復(fù)液有a)檸檬酸鹽緩沖劑,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用檸檬酸鹽緩沖劑做抗原修復(fù)：檸檬酸鹽緩沖劑配方:10mM檸檬酸鈉,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM檸檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0將含有檸檬酸鈉或檸檬酸鹽緩沖劑的染色盤(pán)放到蒸箱或者水浴中,，預(yù)熱到95-100°C。將切片浸沒(méi)于染色盤(pán)中,。蓋子虛掩,，孵育20-40分鐘(研究者需自己決定比較好的孵育時(shí)間)。關(guān)掉蒸箱或水浴,，將染色盤(pán)置于室溫下,，讓切片冷卻20分鐘。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次,，每次2分鐘,。開(kāi)始封閉步驟。 做免疫組化意味什么,？甘肅做得好的免疫組化推薦

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免疫組化的特點(diǎn)：

1）特異性強(qiáng),。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分,，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí),，才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng),。

2）敏感性高。在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制,，只有直接法,、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍,、幾十倍,；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍,、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合,，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作,。

3）定位準(zhǔn)確,、形態(tài)與功能相結(jié)合。該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,，對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義的,。

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