關(guān)于免疫組化的封閉：用和二抗來源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min，然后甩去封閉用血清,，勿洗,；注意：封閉時間根據(jù)具體實驗調(diào)整；封閉液一般選用5%BSA或與二抗來源一致的血清,，切記是BSA,，不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了。①使用血清好還是BSA好,？答：***是待檢樣本會非特異性的和蛋白結(jié)合,，從而導致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合,，從這點看,，BSA和血清沒有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體,，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合,，與抗體特異性無關(guān)，封閉血清中有抗體,，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合,。BSA則無法封閉Fc受體。免疫組化protocol,，詳情請看英瀚斯生物官網(wǎng),。貴州切片免疫組化哪家好

什么是免疫組化？免疫組化的原理是什么,？

1,、定義：用標記的特異性抗體對組織切片或細胞標本中某些化學成分的分布和含量進行組織和細胞原位定性、定位或定量研究,，這種技術(shù)稱為免疫組織化學（immunohistochemistry）技術(shù)或免疫細胞化學（immunocytochemistry）技術(shù),。

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2,、原理：根據(jù)抗原抗體反應和化學顯色原理，組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結(jié)合,，再利用一抗與標記生物素,、熒光素等的二抗進行反應，前者再用標記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合,，通過呈色反應或熒光來顯示細胞或組織中化學成分,，在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應產(chǎn)物，從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。 甘肅免疫組化怎么樣英瀚斯生物,，組織包埋,、切片,、染色,、免疫組化拍照,、報告分析,，一站式搞定,！

臨床應用中,，藥物靶點免疫組化,，英瀚斯生物專業(yè)做實驗外包服務，一站式醫(yī)學科研平臺,。免疫組化及分子病理學方法在疾病診斷中只只起輔助醫(yī)療的作用,，而藥物病理學是用病理學的方法確定藥物醫(yī)療的靶點、評價藥物醫(yī)療的療效,、預測藥物醫(yī)療的反應,，因此藥物靶點免疫組化屬“單獨的診斷”。因此對于對照的設置,、質(zhì)量的控制均需要更高的要求,，如對試劑的要求，不同于一般的診斷試劑,，應按對藥物管理的要求操作,。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫(yī)生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫(yī)療的依據(jù)。

免疫組化結(jié)果中的假陰性是指所有抗體標記的切片均呈陰性,，無陽性信號,，假陰性結(jié)果不是真實的反應。導致假陰性結(jié)果的原因有:(1)抗原修復方法選擇不當,，根據(jù)不同的抗原特點采用不同的修復方法,，大多數(shù)抗體要求熱修復，熱修復又包括高壓修復,、微波修復及煮沸熱修復;而對某些細胞內(nèi)抗原和細胞間質(zhì)抗原需要用酶消化,，如表皮生長因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin則不用修復;(2)一抗本身的問題:一抗效價降低或失效,。在免疫組化中染色結(jié)果的假陰性會導致錯診或漏診,，進而影響臨床診斷及延誤醫(yī)療。解決這一問題的可通過設立陽性對照,，比較兩者染色結(jié)果,。若陽性對照有表達，表明試劑和染色體系及實驗步驟均無問題;若陽性對照無表達,，則檢測過程中某一試劑或某個步驟存在問題，應逐一查找原因,。做免疫組化意味什么,？

免疫組化結(jié)果要如何分析,？

 （1）陽性著色細胞計數(shù)法。在40*光鏡下,，隨機選擇不重疊的10個視野,，機器或人工計數(shù)陽性著色細胞，每組3~6張不同動物組織切片,，然后進行組間比較即可,。

（2）灰密度分析法?？梢酝ㄟ^在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區(qū)域,、相同條件下用image j進行灰密度分析，然后進行統(tǒng)計分析即可,。

（3）評分法,。用光學顯微鏡下對組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色,、淺褐色,、深褐色）、陽性范圍進行評分（1~4分為0~25%,、26~50%,、51~75%、76~100%）,，**終可以分數(shù)相加,，再進行比較。對于以上這幾種方法,，各有利弊,，請細心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻,、背景很淺的高質(zhì)量切片,。

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確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位，臨床上免疫組化也可以進行操作,。對于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤,，用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學來源，進一步確定原發(fā)部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer,、膽管cancer,、胰腺cancer中陽性，而在肺cancer,、乳腺cancer,、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細胞cancer;肌動蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin),、結(jié)蛋白(Desmin),、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預后提供了依據(jù)。貴州切片免疫組化哪家好