免疫組化結(jié)果背景染色較深的原因有哪些?
(1)抗體濃度過高:一抗?jié)舛冗^高是常見的原因之一,。解決辦法是,,每次使用新抗體前應(yīng)當(dāng)對其工作濃度進(jìn)行測試,使每一抗體個(gè)體化,,找到適合自己實(shí)驗(yàn)室的理想工作濃度,,既使是即用型的抗體也應(yīng)如此,不能只簡單的按說明書進(jìn)行染色,。
(2)抗體孵育時(shí)間過長或溫度較高:解決辦法是,,嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程,比較好隨身佩帶報(bào)時(shí)表或報(bào)時(shí)鐘,,及時(shí)提醒,,避免因遺忘而造成時(shí)間延長。現(xiàn)在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,,要求一抗孵育的時(shí)間不是傳統(tǒng)的1小時(shí),,而是30分鐘,因此,,要根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行調(diào)整,。
(3)DAB變質(zhì)和顯色時(shí)間太長:DAB比較好現(xiàn)用現(xiàn)配,如有沉渣應(yīng)進(jìn)行過濾后再用,。配制好的DAB不應(yīng)存放時(shí)間太長,,因?yàn)樵跊]有酶的情況下,,過氧化氫也會(huì)游離出氧原子與DAB產(chǎn)生反應(yīng)而降低DAB的效力,未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的,。DAB的顯色比較好在顯微鏡下監(jiān)控,,達(dá)到理想的染色程度時(shí)立即終止反應(yīng)。但是當(dāng)染**太多時(shí)或用染色機(jī)時(shí),,這樣做似乎不現(xiàn)實(shí),,但至少應(yīng)對一些新的或少用的抗體顯色時(shí)進(jìn)行監(jiān)控,避免顯色時(shí)間過長,。
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免疫組化臨床應(yīng)用中,可以對傳染性疾病診斷,。應(yīng)用抗病毒,、細(xì)菌、zhen菌和寄生蟲抗原的特異性抗體進(jìn)行免疫組化染色,,可以檢測和診斷許多傳染性疾病病原微生物,,如乙型肝炎病毒(HBV)、巨細(xì)胞病毒(CMV),、人乳T狀瘤病毒(HPV),、皰疹病毒(HSV)、丙型肝炎病毒(HVC),、細(xì)小病毒B19,、人禽流行性感冒病毒(AIV)、嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS)等等,,由于免疫組化在傳染性疾病診斷中具有及時(shí)性,、低風(fēng)險(xiǎn)性、高敏感性,、特異性、有效性等特點(diǎn),,可以用于(1)用于人類新病原微生物的識(shí)別;(2)提供快速的形態(tài)學(xué)診斷,,使嚴(yán)重傳染性疾病得以早期醫(yī)療;(3)在無法取得新鮮組織或尚無培養(yǎng)方法的情況下,提供診斷并對發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究和認(rèn)識(shí),。英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),,一站式醫(yī)學(xué)科研平臺(tái),。吉林細(xì)胞免疫組化怎么選擇在南京英瀚斯做的免疫組化,效果不錯(cuò),!
免疫組化在在病理診斷中,,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷,、分類,、預(yù)后判斷等方面產(chǎn)生了重大的影響。由于免疫組化技術(shù)也存在一些局限性,,因此,,深入研究免疫組化原理和技術(shù),并努力實(shí)現(xiàn)規(guī)范化的操作,,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷,、判斷預(yù)后、指導(dǎo)臨床醫(yī)療中的作用,。
觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況,,對抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究,,稱為免疫組織化學(xué),,由于抗原與抗體特異性結(jié)合,因此通過免疫組化使標(biāo)記抗體的顯色劑(酶,、熒光素,、同位素、金屬離子等等)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),。IHC所用標(biāo)本主要為兩大類:組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本,,其中制作組織標(biāo)本更常用、更基本的方法是石蠟切片,。石蠟切片對于組織形態(tài)保存好,,有利于各種染色對照觀察,而且能長期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,,但可進(jìn)行抗原修復(fù),,是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標(biāo)本制作方法。
臨床應(yīng)用中,,藥物靶點(diǎn)免疫組化,,英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),一站式醫(yī)學(xué)科研平臺(tái),。免疫組化及分子病理學(xué)方法在疾病診斷中只只起輔助醫(yī)療的作用,,而藥物病理學(xué)是用病理學(xué)的方法確定藥物醫(yī)療的靶點(diǎn)、評(píng)價(jià)藥物醫(yī)療的療效,、預(yù)測藥物醫(yī)療的反應(yīng),,因此藥物靶點(diǎn)免疫組化屬“單獨(dú)的診斷”,。因此對于對照的設(shè)置、質(zhì)量的控制均需要更高的要求,,如對試劑的要求,,不同于一般的診斷試劑,應(yīng)按對藥物管理的要求操作,。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫(yī)生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫(yī)療的依據(jù),。英瀚斯生物,組織包埋,、切片,、染色、免疫組化拍照,、報(bào)告分析,,一站式搞定!
免疫組化技術(shù)有哪些應(yīng)用,?
定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢,。相比于其他蛋白檢測方法,免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確,、定性靈敏度高,,是定位檢測分析優(yōu)先方法,尤其對于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用,。免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面:惡性**的診斷與鑒別定性,;確定轉(zhuǎn)移性惡性**的原發(fā)部位;對某類**進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型,;軟組織**診斷,;為臨床提供治療方案的選擇;近年來,,隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn),,使許多疑難**得到了明確診斷。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實(shí)用價(jià)值受到了普遍的認(rèn)可,,其在低分化或未分化**的鑒別診斷時(shí),,準(zhǔn)確率可達(dá)50%-75%。
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免疫組化的抗體選擇
抗體是免疫組化實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素之一,。選擇合適的一抗需要考慮其特異性,、靈敏度和適用性。特異性是指抗體只與目標(biāo)蛋白結(jié)合,,而不與其他蛋白發(fā)生交叉反應(yīng),。靈敏度是指抗體能夠檢測低豐度的目標(biāo)蛋白。適用性是指抗體適用于免疫組化實(shí)驗(yàn),,而不是其他實(shí)驗(yàn)(如Western blot),。此外,免疫組化實(shí)驗(yàn)中還需要考慮抗體的宿主物種,、克隆性和濃度,。免疫組化二抗的選擇則需要考慮其與一抗的匹配性,以及是否帶有顯色或熒光標(biāo)記,。 江蘇什么是免疫組化多少錢