免疫組化原理及實驗步驟——實驗外包。眾所周知,，抗體與抗原之間的結合具有高度的特異性,。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細胞中的某些化學物質提取出來,，以其作為抗原或半抗原去免疫實驗動物，制備特異性抗體,，再用這種抗體（第1抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體,，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結合,，形成抗原 - 一抗 - 二抗復合物，將抗原放大,，由于抗體與抗原結合后形成的免疫復合物是無色的,，因此，還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應部位顯示出來,。通過抗原抗體反應及呈色反應,，顯示細胞或組織中的化學成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內發(fā)生的抗原抗體反應產物,，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布,、含量。免疫組化流程是什么樣的,？甘肅細胞免疫組化

免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫(yī)生對其染色結果的判斷,，進而影響病理診斷，所以制作一張良好的免疫組化切片至關重要,，它需要病理醫(yī)生與病理技師兩者間的相互協(xié)調,，密切配合和共同努力，病理醫(yī)生選擇抗體,，設置對照,，判讀結果，指導技術;而技術人員進行實驗操作,，保證染色質量,。在免疫組化切片的制作過程存在多個環(huán)節(jié)，每一環(huán)節(jié)的失誤都可能影響檢測結果,，如抗原保存,，蛋白酶消化，增強技術及對抗體的管理,、使用和試劑的濃度等等,，因此制作一張高質量的免疫組織化學切片是多方面相互配合的結果。做得好的免疫組化英瀚斯生物,，可做免疫組化定量分析,。

病理醫(yī)師日常工作中經常說的一句話應該就是“做個免疫組化吧”；不管是臨床醫(yī)師,，還是患者,，他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化？”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進行細胞的識別,。這一做法的依據是特定細胞和組織中的成分不同,、則化學性質不同，通過染色的方法則可以呈現不同顏色。不過,，由于組織固定或儲存等,，會造成相應物質的活性降低甚至消失，因而限制了特殊染色方法的應用,。隨著免疫學研究的進展,，根據抗原與相應抗體間特異性結合的性質，則有了現在免疫組化的方法：不同細胞,、不同組織中抗原有一定差異,，抗體與被測組織中的特定抗原結合，進而通過一定顯色方法將結合的抗體顯示出來,。如有相應顯色,，則證實可能有被測抗原；無顯色則可能無被測抗原,。當然,，這一方法中需注意相應的“例外”，如抗體的非特異性結合,、非特異性顯色,，則容易造成“假陽性”；或者雖有相關抗原,、但所用抗體與該抗原并未結合等,，則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應用經驗的增加,，這些問題在常規(guī)應用中盡量得以避免,，前者如各種顯色方法的優(yōu)化；后者如抗原修復方法的優(yōu)化,、新型抗體開發(fā)及選擇,。

免疫組化實驗流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結免疫組化詳細步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片,，常規(guī)脫蠟至水,。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內源性過氧化物酶活性,。

3）蒸餾水沖洗,，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復：微波（建議30分鐘內4次中火）、高壓,、酶修復方法,。自然冷卻，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘,，盡可能與二抗來源一致,。傾去,，勿洗。

6）滴加適當比例稀釋的一抗,，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（比較好復溫）,。PBS沖洗，3分鐘×5次,。

7）滴加生物素標記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h,。

8）PBS沖洗,，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶）,，室溫或37℃孵育30分鐘-1h,。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次,。

11）顯色劑顯色（DAB等）,。

12）自來水充分沖洗。

13）可進行復染,，脫水,，透明。

14）選擇適當的封片劑封片,。 哪里可以做免疫組化,？

免疫組化的抗體選擇

抗體是免疫組化實驗成功的關鍵因素之一。選擇合適的一抗需要考慮其特異性,、靈敏度和適用性,。特異性是指抗體只與目標蛋白結合，而不與其他蛋白發(fā)生交叉反應,。靈敏度是指抗體能夠檢測低豐度的目標蛋白,。適用性是指抗體適用于免疫組化實驗，而不是其他實驗（如Western blot）,。此外,，免疫組化實驗中還需要考慮抗體的宿主物種、克隆性和濃度,。免疫組化二抗的選擇則需要考慮其與一抗的匹配性,，以及是否帶有顯色或熒光標記。 英瀚斯生物,，專業(yè)承接免疫組化等各類病理染色檢測,！青海什么是免疫組化怎么樣

免疫組化的樣本保存要求是什么？甘肅細胞免疫組化

免疫組化在在病理診斷中,，隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現及越來越多的新型抗體的出現,，免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷,、分類、預后判斷等方面產生了重大的影響,。由于免疫組化技術也存在一些局限性,，因此，深入研究免疫組化原理和技術,，并努力實現規(guī)范化的操作,，才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預后,、指導臨床醫(yī)療中的作用,。

觀察組織切片中抗原的數量及其在組織中的分布情況，對抗原進行定位,、定性及定量的研究,，稱為免疫組織化學，由于抗原與抗體特異性結合,，因此通過免疫組化使標記抗體的顯色劑(酶,、熒光素、同位素,、金屬離子等等)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),。IHC所用標本主要為兩大類:組織標本和細胞標本，其中制作組織標本更常用,、更基本的方法是石蠟切片,。石蠟切片對于組織形態(tài)保存好，有利于各種染色對照觀察,，而且能長期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對組織內抗原暴露有一定的影響,，但可進行抗原修復，是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標本制作方法,。 甘肅細胞免疫組化