免疫組化的特點:
1)特異性強。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,,因此,,免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,,LCA顯示淋巴細胞成分,。只有當組織細胞中存在交叉抗原時,,才會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
2)敏感性高,。在應(yīng)用免疫組化的起始階段,,由于技術(shù)上的限制,只有直接法,、間接法等敏感性不高的技術(shù),,那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍,;現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn),,使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結(jié)合,,這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng),,使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。
3)定位準確,、形態(tài)與功能相結(jié)合,。該技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),可在組織和細胞中進行抗原的準確定位,,因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察,,這樣就可以進行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,對病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義的,。
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目前幾種常用免疫組化方法簡單介紹
1)免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。由于免疫熒光技術(shù)特異性強,、靈敏度高,、快速簡便,所以在臨床病理診斷,、檢驗中應(yīng)用較廣。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,,先將已知抗體標上熒光素,,以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察,。當抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光,,從而可確定組織中某種抗原的定位,進而還可進行定量分析,。
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2)免疫酶標方法免疫酶標方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來的技術(shù),?;驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,,通過光鏡或電鏡,對細胞表面和細胞內(nèi)的各種抗原成分進行定位研究,。免疫酶標技術(shù)是目前**常用的技術(shù),。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點是:定位準確,對比度好,,染色標本可長期保存,,適合于光、電鏡研究等,。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速,,已經(jīng)衍生出了多種標記方法,且隨著方法的不斷改進和創(chuàng)新,,其特異性和靈敏度都在不斷提高,,使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法,、SP三步法,、即用型二步法檢測系統(tǒng)等。
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免疫組化有哪幾種分類 ,?
1)按標記物質(zhì)的種類,如熒光染料,、放射性同位素,、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白,、膠體金等,,可分為免疫熒光法、放射免疫法,、免疫酶標法和免疫金銀法等,。
2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法),。與直接法相比,,間接法的靈敏度提高了許多。
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3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(***)法;親和連接,,如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法,、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法,;聚合物鏈接,,如即用型二步法,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測,。
免疫組化的基本原理
免疫組化(Immunohistochemistry, IHC)是一種利用抗原-抗體特異性結(jié)合的原理,,通過顯色反應(yīng)在組織切片上定位特定蛋白質(zhì)的技術(shù)。該技術(shù)結(jié)合了免疫學(xué)和組織學(xué)的優(yōu)點,,能夠在細胞或亞細胞水平上精確顯示目標蛋白的分布和表達情況,。免疫組化的基本原理是利用一抗與目標蛋白結(jié)合,再通過二抗與一抗結(jié)合,,通過顯色系統(tǒng)(如DAB)使目標蛋白可視化,。這種方法不僅能夠提供蛋白質(zhì)的定位信息,還能通過半定量分析評估蛋白質(zhì)的表達水平,。 做免疫組化意味什么,?
免疫組化的質(zhì)量控制免疫組化的質(zhì)量控制是確保實驗結(jié)果可靠性和重復(fù)性的關(guān)鍵步驟。質(zhì)量控制包括實驗前的抗體驗證,、實驗中的陽性對照和陰性對照,,以及實驗后的結(jié)果評估??贵w驗證是通過Western blot或免疫熒光等方法驗證抗體的特異性和靈敏度,。陽性對照是使用已知表達目標蛋白的組織或細胞,確保實驗系統(tǒng)的有效性,。陰性對照是使用不表達目標蛋白的組織或細胞,,排除非特異性結(jié)合。結(jié)果評估是通過圖像分析軟件對顯色結(jié)果進行定量評估,,確保實驗結(jié)果的可靠性,。免疫組化結(jié)果怎么看?安徽靠譜免疫組化多少錢
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1,、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h,脫蠟至水,,用PBS沖洗三次,,每次5min,。
2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù),,中火至沸后斷電,,間隔10min低火至沸。
3,、自然冷卻后PBS洗3次,,每次5min。4,、切片放入3%過氧化氫溶液,,室溫下孵育10min,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,。
5,、PBS洗3次,每次5min,,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷),。
6、去除BSA液,,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,,4℃過夜。
7,、PBS洗3次,,每次5min。
8,、去除PBS液,,每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,4℃孵育50min,。
9,、PBS洗3次,每次5min,。
10,、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,,顯微鏡控制顯色,。
11、顯色完全后,,蒸餾水或自來水沖洗,,蘇木素復(fù)染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來水沖洗,,氨水返藍,,流水沖洗。
12,、切片經(jīng)過梯度酒精(70-100%)10min一個梯度,,脫水干燥,二甲苯透明,,中性樹膠封固,。 甘肅組織免疫組化外包