免疫組化的局限性,，可能會有假陽性。陽性信號定位不正確即為假陽性,，包括著色不勻,、背景著色、邊緣效應(yīng),，另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽性結(jié)果,。假陽性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷В贵w有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用,，過期的抗體或者不著色,，或者背景著色，形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織,，組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過長,，由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短，冬季孵育時(shí)間稍長;(4)操作過程中組織變干,，造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,，產(chǎn)生假陽性;(5)3，3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長，DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,，配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),，因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色，如內(nèi)源性酶血紅蛋白,、肌紅蛋白等造成的著色,，可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也會產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中,，使壞死組織呈較高的背景染色,，在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。做好免疫組化,，你需要了解這些,！山東免疫組化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞爬片免疫組化檢測實(shí)驗(yàn)步驟

1、選擇貼壁良好的細(xì)胞爬片,，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干,。

2、PBS洗3次,，每次5min,。3、切片放入3%過氧化氫溶液,，室溫下孵育10min,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。

4,、PBS洗3次，每次5min,，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）,。

5、去除BSA液,，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,，4℃過夜。

6,、PBS洗3次,，每次5min。

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7,、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗，4℃孵育50min,。

8,、PBS洗3次，每次5min,。

9,、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,，顯微鏡控制顯色,。

10、顯色完全后,，蒸餾水或自來水沖洗,，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸酒精分化（1s）,，自來水沖洗,，氨水返藍(lán)，流水沖洗,。

11,、切片經(jīng)過梯度酒精（70-100%）10min一個(gè)梯度，脫水干燥,，二甲苯透明,，中性樹膠封固。 吉林切片免疫組化價(jià)格免疫組化怎么做,？步驟方法,？

什么是免疫組化？免疫組化的原理是什么,？

1,、定義：用標(biāo)記的特異性抗體對組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究,，這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry）技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）技術(shù),。

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2,、原理：根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合,，再利用一抗與標(biāo)記生物素,、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng)，前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合,，通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分,，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。

免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本是什么樣的,？

實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類,，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片,、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片,。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用、**基本的方法,，對于組織形態(tài)保存好,，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察,；還能長期存檔,，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,，但可進(jìn)行抗原修復(fù),，是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法。

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確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位，臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作,。對于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤,，用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來源，進(jìn)一步確定原發(fā)部位,。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer,、膽管cancer、胰腺cancer中陽性,，而在肺cancer,、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動蛋白(Actin),、肌球蛋白(Myosin),、結(jié)蛋白(Desmin),、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù),。在南京英瀚斯做的免疫組化，效果不錯(cuò),！黑龍江切片免疫組化注意事項(xiàng)

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免疫組化的DAB顯色時(shí)間如何把握？

1,、DAB顯色時(shí)間不是固定的,，主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間，到出現(xiàn)淺棕色本底時(shí)即可沖洗；

2,、DAB顯色時(shí)間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色,，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間,；

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3,、此外,，若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,，需要延長封閉時(shí)間,；

4、DAB顯色時(shí)間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色,，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時(shí)間過短（比較好一抗4度過夜）,；另一方面就是封閉時(shí)間過長。 山東免疫組化實(shí)驗(yàn)