免疫組化的特點(diǎn)：

1）特異性強(qiáng)。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,，因此,，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分,，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí),，才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng),。

2）敏感性高。在應(yīng)用免疫組化的起始階段,，由于技術(shù)上的限制,，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù),，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍,、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn),，使抗體稀釋上千倍,、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng),，使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作,。

3）定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合,。該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,，對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義的。

英瀚斯生物,，自建病理平臺(tái)實(shí)驗(yàn)室,，專業(yè)免疫組化,。 英瀚斯生物，專業(yè)病理染色切片平臺(tái),，免疫組化效果好,！湖北切片免疫組化注意事項(xiàng)

免疫組化的實(shí)驗(yàn)步驟

免疫組化的實(shí)驗(yàn)步驟通常包括組織固定,、切片,、抗原修復(fù)、封閉,、一抗孵育,、二抗孵育、顯色和復(fù)染等,。首先,，組織樣本需要經(jīng)過(guò)固定（如福爾馬林固定）以保持其形態(tài)結(jié)構(gòu)。然后,，將固定后的組織包埋在石蠟中并切成薄片,。抗原修復(fù)是為了暴露被固定過(guò)程掩蓋的抗原表位,，常用的方法有熱修復(fù)和酶消化,。封閉步驟是為了減少非特異性結(jié)合，通常使用血清或BSA,。一抗孵育是關(guān)鍵步驟,，一抗與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合。二抗孵育則是通過(guò)二抗與一抗結(jié)合,，并連接顯色系統(tǒng),。，通過(guò)顯色和復(fù)染使目標(biāo)蛋白可視化,。 江西動(dòng)物組織免疫組化注意事項(xiàng)常見的免疫組化方法有哪些,？

免疫組化的抗原修復(fù)

很多抗原的可視性可以通過(guò)抗原修復(fù)來(lái)提高，抗原修復(fù)可以打破福爾馬林固定時(shí)形成的蛋白質(zhì)交聯(lián),，從而使被掩藏的抗原顯現(xiàn)出來(lái),。抗原修復(fù)技術(shù)包括不同時(shí)間長(zhǎng)度的加熱或者利用蛋白酶來(lái)做酶消化,，例如蛋白酶K,，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加熱的方法通常會(huì)用到微波爐,，高壓鍋,，蒸箱或水浴。將樣品在接近100°C高溫加熱20分鐘后再冷卻同等的時(shí)間,。**常用的抗原修復(fù)液有a)檸檬酸鹽緩沖劑,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用檸檬酸鹽緩沖劑做抗原修復(fù)：檸檬酸鹽緩沖劑配方:10mM檸檬酸鈉,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM檸檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0將含有檸檬酸鈉或檸檬酸鹽緩沖劑的染色盤放到蒸箱或者水浴中,，預(yù)熱到95-100°C,。將切片浸沒于染色盤中。蓋子虛掩,，孵育20-40分鐘(研究者需自己決定比較好的孵育時(shí)間),。關(guān)掉蒸箱或水浴，將染色盤置于室溫下,，讓切片冷卻20分鐘,。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分鐘,。開始封閉步驟,。

免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷，英瀚斯生物為您介紹,。對(duì)于反應(yīng)性增生還是cancer性增生,，可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測(cè)B淋巴細(xì)胞增生的單克隆或多克隆性來(lái)區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時(shí),，濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白(bcl-2),，bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中，由于90%以上cancer性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá),，bcl-2陽(yáng)性,。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA),，周期素(Cycling),，核抗原(Ki-67)通過(guò)對(duì)cancer細(xì)胞增生的程度作出評(píng)價(jià)，從而提示增生細(xì)胞的良惡性,。免疫組化實(shí)驗(yàn)原理,，操作步驟盡在英瀚斯實(shí)驗(yàn)外包。

免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟：

1,、SP三步法

1）石蠟切片,，常規(guī)脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無(wú)色液體）孵育10-30分鐘,，以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性,。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）,、高壓,、酶修復(fù)方法。自然冷卻,，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘,，盡可能與二抗來(lái)源一致。傾去,，勿洗,。

6）滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過(guò)夜（比較好復(fù)溫）。PBS沖洗,，3分鐘×5次,。

7）滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h,。

8）PBS沖洗,，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶）,，室溫或37℃孵育30分鐘-1h,。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次,。

11）顯色劑顯色（DAB等）,。

12）自來(lái)水充分沖洗。

13）可進(jìn)行復(fù)染,，脫水,，透明。

14）選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?做免疫組化的目的是什么,？四川小鼠免疫組化實(shí)驗(yàn)

關(guān)于免疫組化,，你想知道的都在這里！湖北切片免疫組化注意事項(xiàng)

確定來(lái)源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位,，臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作,。對(duì)于來(lái)源不明的轉(zhuǎn)移瘤，用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來(lái)源,，進(jìn)一步確定原發(fā)部位,。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer,、胰腺cancer中陽(yáng)性,，而在肺cancer、乳腺cancer,、腎cancer中陰性;Tg陽(yáng)性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽(yáng)性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽(yáng)性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽(yáng)性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動(dòng)蛋白(Actin),、肌球蛋白(Myosin)、結(jié)蛋白(Desmin),、肌紅蛋白(Myoglobin)陽(yáng)性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽(yáng)性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù),。湖北切片免疫組化注意事項(xiàng)