HE染色伊紅溶液中加入少量的冰醋酸(一般小于10%就行),,可改變組織等電點,促進伊紅與胞漿蛋白質(zhì)結(jié)合,,其本身不參與染色的反應,。當蘇木素染色效能極高,很短時間就導致核漿共染時,,可適當?shù)靥砑颖姿?一般不超過2%),,抑制蘇木素染色效能,方便控制染色時間,,同時也能提高蘇木素染色的清晰度?,F(xiàn)在有商用的HE染色液賣,但是質(zhì)量參差不齊,。如果課題組較大,,完全可以自己配制,效果也挺好,。配制為乙酸濃度5%-7.5%和鹽酸濃度為0.5%-1%的蘇木素溶液放置一周,,即可完全成熟,染色效果好,,氧化膜和結(jié)晶都很少(一般蘇木素中酸度越低越容易產(chǎn)生氧化膜和結(jié)晶,,這也是提示更換蘇木素的標志之一)。比較基礎的病理染色HE染色,。內(nèi)蒙古專業(yè)的HE染色服務
HE染色觀察肝臟HE染色切片,,首先要在顯微鏡下找到肝臟的標志性結(jié)構(gòu)——肝小葉,。顯微鏡首先調(diào)4倍物鏡,調(diào)準焦螺旋至視野清晰,,可以看到肝小葉結(jié)構(gòu),。人的肝小葉之間結(jié)締組織少,小葉分隔不明顯,,但動物如豬或小鼠,,其肝小葉分界非常明顯。肝小葉**有**靜脈,,在橫切片上顯示為空洞,。肝小葉之間為將物鏡調(diào)制10倍或20倍,就可以清楚地看到肝小葉結(jié)構(gòu),。肝細胞以**靜脈為中心向周圍放射狀排列,,稱為肝板。一般在20倍物鏡下可以清晰看到肝細胞,。20倍物鏡下,,肝細胞內(nèi)染色為藍色的是細胞核,細胞核大而圓,,居中,,異染色質(zhì)少而著色淺,能清晰看到核仁,。肝細胞胞質(zhì)豐富,,多成嗜酸性,當?shù)鞍踪|(zhì)合成旺盛時,,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)散在的嗜堿性物質(zhì),。肝細胞內(nèi)有豐富的細胞器比如溶酶體、高爾基體,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),,等等,但是在光鏡下是無法看到的,,需要在電鏡下才能觀察到,。當然,肝小葉內(nèi)除了肝細胞,,還有膽小管,、肝血竇、肝巨噬細胞等組織形態(tài),,但是在HE染色時并不容易觀察到,。做肝臟HE染色切片主要目的一般都是為了觀察肝細胞形態(tài)是否完整、胞核有無增大、肝小葉形態(tài)是否完整,,以檢測藥物等刺激因素對肝臟的損傷作用,。青海比較好的HE染色價格HE染色結(jié)果如何分析和讀片?
HE染色常見問題:切片染色不均勻,,有片狀的弱著**存在答:(1)取材時組織太厚,,固定過久,導致深部組織固定不佳,,而表淺組織過度固定,,而透明、脫水,、浸蠟均是如此,,這樣在后期染色時就會出現(xiàn)染色不均勻。應該將厚的組織剖開固定,。(2)制片過程有問題,,切片厚薄不一,或者有刀痕,,或組織與玻片間存在氣泡,。同一張切片厚薄不一,,一般都是在制片時,,刀片固定不佳或刀片鈍或刀片與組織角度不佳(一般比較好角度為5°)(3)脫蠟前未烘烤,脫蠟時間過短或脫蠟液使用過久,,導致脫蠟不徹底,。(4)染色液過少,著色不均勻,;或染色時部分組織干涸而另一部分濕潤,,這樣會導致組織吸附染料的能力不一。(5)分化不當,。南京英瀚斯,,專業(yè)的病理染色實驗服務平臺。
HE染色法,,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一,。蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色,;伊紅為酸性染料,,主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。去氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,,帶負電荷,,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中稱藍色,,所以細胞核被染成藍色,。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽離子結(jié)合使胞漿染色,,細胞漿、紅細胞,、肌肉,、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,,與藍色的細胞核形成鮮明對比,。伊紅是細胞漿的良好染料。由于組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣,。經(jīng)蘇木精染色后,,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍,,如處理適宜,,可使細胞核著清楚的深藍色,胞漿等其它成分脫色,。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,,使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點均可顯示出來,。HE染色過程中常見的問題以及應對方法,。
HE染色常見問題:Q3:細胞核染色過淺,顏色暗淡答:切片在蘇木素染液中停留過短,,或蘇木素過度氧化失效,,或分化時間太長。對策:重新染色,。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉,、0.5%氨水、飽和的碳酸氫鈉溶液,、乙醇溶液,,每個3-5min即可,接著重新染色,??梢赃m當?shù)亟M織的嗜堿性以增強核染色,如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3h,,自來水沖洗5-10min染色,,或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h,自來水沖洗10min染色。Q4:細胞核染色過深,,胞漿著藍色答:切片在蘇木素染液中停留過長,;或切片太厚;或分化時間太短,。這種情況首先鏡下看看切片厚度(比較好厚度1-2層細胞核),,要么重新染色,要么重新制片,。南京英瀚斯,,專業(yè)的病理染色實驗服務平臺。HE染色取材和樣本保存方式,。湖南專業(yè)的HE染色服務
HE染色的基本原理和結(jié)果分析,。內(nèi)蒙古專業(yè)的HE染色服務
HE染色常見問題:Q5:細胞核呈棕紅色改變答:蘇木素染液過度氧化;或蘇木素染色后反藍不足導致,。應該立即更換蘇木素染色液,。或在流動自來水(一般自來水PH7.5-7.8),,或在稀釋的氨水溶液,,或在0.2%碳酸氫鈉中適當浸泡,這些步驟均可一定程度地加強蘇木素染色后的反藍效果,。Q6:伊紅染色較淡答:伊紅的PH改變了(PH可能已大于5),;或反藍液體未漂洗干凈,殘留后影響胞漿嗜酸性染色,;或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久,。對策:檢查伊紅染色液PH,,可采用乙酸調(diào)至4.6-5.0,。根據(jù)以上提示,調(diào)整實驗步驟,。內(nèi)蒙古專業(yè)的HE染色服務