免疫組化在什么情況下進行組織抗原修復(fù),,抗原修復(fù)的條件是什么,?
(1)由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中,發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用,,從而失去抗原性,。通過抗原修復(fù),,使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露,提高抗原檢測率,。
(2)修復(fù)方法從強到弱一般分為三種,,高壓修復(fù)、微波修復(fù),、胰酶修復(fù),。修復(fù)液也分為若干種(具體的可以查閱相關(guān)資料,大量的:中性的,、高pH的等),。
(3)微波修復(fù),我們一般用6min*4次,,效果不錯,。
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關(guān)于免疫組化的封閉:用和二抗來源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min,然后甩去封閉用血清,,勿洗,;注意:封閉時間根據(jù)具體實驗調(diào)整;封閉液一般選用5%BSA或與二抗來源一致的血清,,切記是BSA,,不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了,。①使用血清好還是BSA好?答:***是待檢樣本會非特異性的和蛋白結(jié)合,,從而導(dǎo)致背景過高,,因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合,從這點看,,BSA和血清沒有明顯區(qū)別,。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體,可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合,,與抗體特異性無關(guān),,封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合,。BSA則無法封閉Fc受體,。江蘇病理免疫組化注意事項哪里可以做免疫組化?
免疫組化原理及實驗步驟——實驗外包,。眾所周知,,抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性,,即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來,,以其作為抗原或半抗原去免疫實驗動物,制備特異性抗體,,再用這種抗體(第1抗體)作為抗原去免疫動物制備第二抗體,,并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合,形成抗原 - 一抗 - 二抗復(fù)合物,,將抗原放大,,由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的,因此,,還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來,。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分,,在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,,從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量,。
免疫組化臨床應(yīng)用對“未分化”cancer的分類,。未分化cancer包括cancer或肉瘤,在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer細(xì)胞的起源特征不能分類,,初步區(qū)分組織學(xué)類型用非特異性抗體,,在其基礎(chǔ)上再選用特異性抗體做進一步鑒定。如分化差的cancer可顯示Vimentin或S-100蛋白,,有時淋巴瘤可以表達(dá)上皮膜抗原,,一些黑色素瘤表現(xiàn)出角蛋白,,這同時也強調(diào)了在cancer診斷中應(yīng)使用一組抗體而不是單個抗體。如果您有實驗外包的需求,,可以與我們南京英瀚斯生物進行聯(lián)系,,我們也有做免疫組化的服務(wù)!免疫組化結(jié)果怎么看,?
在臨床應(yīng)用中,,免疫組化還可以進一步分類不同qi官與組織交界處cancer。由于重疊的特征,,在一些組織qi官交界處的cancer,,只憑組織學(xué)基礎(chǔ)對cancer進行分類很困難。如胃腸道梭形細(xì)胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤,,是間質(zhì)起源的胃腸道間質(zhì)瘤(GIST),,還是神經(jīng)起源的神經(jīng)鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細(xì)胞cancer,兩者較難區(qū)別,,且醫(yī)療與預(yù)后明顯的不同,,但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細(xì)胞cancer,而角蛋白陽性則為胚胎cancer,。免疫組化實驗原理,,操作步驟盡在英瀚斯實驗外包。福建什么是免疫組化要多久
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免疫組化有哪幾種分類 ?
1)按標(biāo)記物質(zhì)的種類,,如熒光染料,、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶),、鐵蛋白,、膠體金等,可分為免疫熒光法,、放射免疫法,、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。
2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步,、三步或多步法),。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多,。
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3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(***)法,;親和連接,如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法,、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法等,,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,,如即用型二步法,,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測。 福建什么是免疫組化要多久
南京英瀚斯生物科技有限公司是一家服務(wù)型類企業(yè),,積極探索行業(yè)發(fā)展,,努力實現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新。英瀚斯生物是一家有限責(zé)任公司(自然)企業(yè),,一直“以人為本,,服務(wù)于社會”的經(jīng)營理念;“誠守信譽,持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針,。公司始終堅持客戶需求優(yōu)先的原則,,致力于提供高質(zhì)量的實驗外包,動物模型構(gòu)建,,細(xì)胞分子實驗,,病理檢測。英瀚斯生物將以真誠的服務(wù),、創(chuàng)新的理念,、***的產(chǎn)品,為彼此贏得全新的未來,!