HE染色骨組織的處理方式:組織里存有鈣鹽可妨礙用常規(guī)方法制作良好切片。骨組織及鈣化病灶,,經(jīng)過固定后,,需要先將鈣鹽除去使組織軟化,才能進行常規(guī)切片,。如果脫鈣不全,,則切片容易撕開或碎裂,損傷切片刀刀刃,。脫去鈣鹽的過程,,稱為脫鈣。骨組織固定24小時后,,鋸下不超過0.5cm厚的薄骨片,,以4%甲醛溶液固定后,進行脫鈣,。骨組織過厚則需延長脫鈣時間,,但長時間浸于強酸會影響切片染色效果。取材骨組織固定于10%甲醛溶液24小時后再鋸取厚度約0.5cm骨片固定以10%甲醛溶液固定2天脫鈣將組織置于脫鈣劑中,,每日更換新鮮液,,直至組織軟化為止除酸流水沖洗24小時脫水、浸蠟,、切片進行常規(guī)脫水、透明,、浸蠟,、切片南京英瀚斯,專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺,。石蠟組織切片的HE染色,。廣西性價比高的HE染色外包
HE染色標本一般是針對石蠟標本,脂滴和石蠟都是的有機物,, 都具有非極,,脂滴應(yīng)該可以溶解石蠟的。 HE染色就是用蘇木精和伊紅對細胞內(nèi)的核糖體和細胞質(zhì)染色的方法,。 H:Hematoxylin,,蘇木精 E:Eosin,伊紅 蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿染料,可將細胞核和細胞內(nèi)核糖體染成藍紫色,,被堿染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿,。 伊紅(,E)是一種酸染料,,能將細胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,,被酸染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸。染色前,,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,***入蒸餾水,,就可染色,。南京英瀚斯生物江西靠譜的HE染色檢測HE染色,優(yōu)先南京英瀚斯生物,。
HE染色顯微鏡下見切片內(nèi)有大量水珠分析以及應(yīng)對原因:切片經(jīng)梯度乙醇處理后沒有完全脫水,,導(dǎo)致二甲苯透明中性樹膠封固后殘留大量水分。對策:移去蓋玻片,,用二甲苯溶解封固劑如中性樹膠,。將切片置入新鮮的無水乙醇中,待切片重新脫水完全后,,用新二甲苯透明,,中性樹膠封固。所有用于脫水和透明的液體,,在使用一定時間以后,,應(yīng)即時更換。光鏡下切片某些區(qū)域難以聚焦分析以及應(yīng)對原因:蓋玻片上可能有封固切片的封固劑,。對策:移去蓋玻片,,重新用干凈的蓋玻片封片
HE染色實驗步驟:(1)樣品制備:對于貼壁生長細胞,胰酶消化,,調(diào)整細胞濃度約1×105/ml,,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養(yǎng)相應(yīng)時間后,,取出細胞爬片,,用PBS洗滌3次。(2)樣品固定:95%乙醇固定20min,,PBS洗滌2次,,每次1min。(3)染核:蘇木素染液染色2-3min,,自來水洗滌,。(4)分色:鏡下觀察,,若細胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,,自來水洗滌,。(5)染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1min,自來水洗滌,。(6)吹干或自然晾干細胞爬片后,,中性樹膠封片。若細胞用4%多聚甲醛固定,,則染色時間相應(yīng)延長,,蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可HE染色的實驗?zāi)康囊约皩嶒灲Y(jié)果分析,。
HE染色常見問題:成片的染色模糊不清,,灰染答:(1)組織未及時固定,部分自溶,;或固定不佳,,深部組織未處理到。這種只能重新固定了,。(2)盡管乙醇也是一種固定液,,但盡量少用或不用,因為其會導(dǎo)致組織發(fā)硬變脆,,染色效果不好,。(3)包埋時蠟的溫度過高,或切片后烤片時間和溫度過久過高都不好,,可能會導(dǎo)致無法染色,。(4)脫蠟不徹底;染料有問題,;分化過度導(dǎo)致的顏色變淡,,鏡下組織界限不清;染完后的脫水和透明不佳,,水霧殘留在組織上,。(5)通風窗中(防止空氣中的水霧),戴口罩操作封片(減少哈氣帶來的水霧),。HE染色過程中常見的問題以及應(yīng)對方法。四川比較好的HE染色報告
HE染色結(jié)果如何分析和讀片,?廣西性價比高的HE染色外包
HE染色:在組織病理學中,,蘇木素-伊紅染色是一種日常使用比較普遍的常規(guī)染色方法。常規(guī)蘇木素染色的對比染色是用伊紅,,也有采用焰紅,,因為焰紅比伊紅色澤更鮮明,還有采用橘黃G,比布里希猩紅,,波爾多紅等作為對比染色,。伊紅是比較常用的胞質(zhì)染料,本身溶于醇而不溶于水,,為磚紅色粉末狀或醬紅色結(jié)晶,。配方:伊紅Y(水溶)0.5-1g,蒸餾水99ml,。如果取用伊紅Y(醇溶性)應(yīng)當溶于99ml 75%或95%的乙醇中,。如果在伊紅液中加入0.5ml冰醋酸,可以加速其染色過程,,使得胞質(zhì)的色澤更加艷麗,。結(jié)果是細胞核呈藍色,胞質(zhì),、肌肉,、結(jié)締組織、紅細胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色,。鈣鹽和各種微生物也可染成藍色或紫藍色,。廣西性價比高的HE染色外包
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