細(xì)胞攝取診療性外泌體：從樹(shù)突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用，包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對(duì)靶細(xì)胞的影響可能是通過(guò)不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來(lái)控制的。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏,、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用。外泌體的內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合,，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中,。隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲(chóng)領(lǐng)域,。細(xì)菌外泌體提取試劑盒廠家

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1,、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高,、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性,，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。2,、PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高,。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。3,、色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍,。外泌體成分鑒定1983年,，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。

外泌體提取在短時(shí)間（一周之內(nèi)）使用,，可以放在4度保存,，如果長(zhǎng)時(shí)間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進(jìn)行分裝,，分別放在-20度或-80度,。外泌體檢測(cè)方法：外泌體分離之后，需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,，多角度進(jìn)行鑒定。l,、透射電鏡鑒定法：簡(jiǎn)稱TEM,，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。2,、納米顆粒追蹤分析法：簡(jiǎn)稱NTA,，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快,，檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。

外泌體的臨床應(yīng)用：間充質(zhì)干細(xì)胞是目前較普遍使用的細(xì)胞類型，它具有自我更新,，多向分化,、分泌細(xì)胞因子和細(xì)胞外囊泡體、免疫調(diào)節(jié),、來(lái)源普遍等特點(diǎn),，在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果。間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體與間充質(zhì)干細(xì)胞有著相似的功能,，包括修復(fù)與再生組織,、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，但外泌體相對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞又有許多優(yōu)勢(shì),。首先,，間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體更穩(wěn)定，更好保存,，易于管理和控制,，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量。其次,，它們沒(méi)有活細(xì)胞,，不會(huì)像間充質(zhì)干細(xì)胞那樣可能會(huì)過(guò)多增殖而放大療效或者病變導(dǎo)致疾病加重；另外,，它有可能避免某些針對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控問(wèn)題,，間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體有代替間充質(zhì)干細(xì)胞的趨勢(shì)。在免疫系統(tǒng)中,，據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過(guò)外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制,。

外泌體的相關(guān)成分：1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,，是磷脂雙分子層,。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,，能綁定特異性的肽鏈,。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins,、RAN,、GTPases。5,、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide、SM,、PC,，限制膜流動(dòng)，參與包括跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6,、外泌體中含有核酸,，包括miRNA、DNA,、lncRNA,、mRNA；同時(shí)還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中,。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral,、ARF6,、PLD2、RAB家族,。8,、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU），進(jìn)行主動(dòng)包埋,。外泌體的膜同細(xì)胞一樣，是磷脂雙分子層,。外泌體為細(xì)胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領(lǐng)域,。植物提取試劑盒銷(xiāo)售

外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,，從而活躍細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,。細(xì)菌外泌體提取試劑盒廠家

ELISA與WB的原理一樣，在抗體包被的微孔板中加入待測(cè)樣品,、封閉,、一抗孵育，洗滌后加入酶標(biāo)待測(cè)物形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，徹底洗滌后加顯色劑并用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值,，結(jié)尾用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算外泌體表達(dá)量,。ELISA能實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體特異性蛋白的定量。其他外泌體鑒定方法還有微流體測(cè)定法和外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)分析等,。由于外泌體在各種生命過(guò)程中的重要作用及其作為疾病生物標(biāo)志物和藥物輸送系統(tǒng)的潛力,，人們對(duì)此領(lǐng)域的興趣越來(lái)越高。盡管目前在技術(shù)上取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步,，但尚未建立對(duì)外泌體進(jìn)行準(zhǔn)確和標(biāo)準(zhǔn)化鑒定以及定量的方法,，關(guān)于外泌體的量應(yīng)由囊泡顆粒的數(shù)量、囊泡蛋白的量或囊泡數(shù)與蛋白之比來(lái)定義仍存在比較多爭(zhēng)論,。建立外泌體分離,、表征以及效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問(wèn)題。細(xì)菌外泌體提取試劑盒廠家

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