細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,,包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細(xì)胞分泌,,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì)、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子。近年來,,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域,;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。外泌體的提取的方式:密度梯度離心法,。細(xì)胞外泌體提取試劑盒分類
外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學(xué)特性,它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用,。除了它們的診療潛力,,外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道,并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成,?;谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價值。疾病的進(jìn)展和對診療的反應(yīng)也可以通過外泌體的多組分分析來確定,。河南外泌體Dil外泌體的大?。和饷隗w的直徑約30-150nm。
質(zhì)膜的連續(xù)內(nèi)陷較終導(dǎo)致多泡體的形成,,多泡體可與細(xì)胞內(nèi)的其他囊泡和細(xì)胞器交叉,,從而增加了外泌體成分的多樣性。根據(jù)細(xì)胞來源的不同,,細(xì)胞外囊泡,,包括外泌體,可以包含細(xì)胞的許多成分,,包括DNA,、RNA、脂質(zhì),、代謝物,、胞質(zhì)和細(xì)胞表面蛋白。目前產(chǎn)生外泌體的生理目的尚不清楚,,需要進(jìn)一步研究,。一個推測的作用是外泌體可能從細(xì)胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。較近的研究也表明外泌體中特定細(xì)胞成分的功能,、靶向,、機(jī)制驅(qū)動的積累,提示它們在調(diào)節(jié)細(xì)胞間通訊中發(fā)揮作用,。
酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA):將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,,將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,由于抗體-抗原相互作用,,表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上,。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉,并使用另一種抗體檢測固定的外泌體,。ELISA已用于從尿液,、血漿和血清中分離出外泌體,當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液(已知外泌體的量)創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時,,甚至可以進(jìn)行定量,。但是,此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進(jìn)行預(yù)處理,。同樣,,流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度,。外泌體屬于胞外囊泡類,除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡,。外泌體的數(shù)量:人體中大約有1014個,近乎于平均每個細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個,。
外泌體提取在短時間(一周之內(nèi))使用,,可以放在4度保存,如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存,。也可以將外泌體進(jìn)行分裝,,分別放在-20度或-80度。外泌體檢測方法:外泌體分離之后,,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定,。l,、透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。2、納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral,、ARF6、PLD2,、RAB家族,。細(xì)胞上清外泌體攝取
外泌體的提取分離方法:PEG-base沉淀法。細(xì)胞外泌體提取試劑盒分類
當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,,其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式,,如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸,、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能,。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈,、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化,、肉瘤侵襲等方方面面,。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了肉瘤的生長與侵襲,。細(xì)胞外泌體提取試劑盒分類
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