外泌體分離的主要挑戰(zhàn)之一是消除納米級污染物,，包括干擾外泌體標志物解析的游離核酸和脂蛋白,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術,。盡管如此,，它仍難以符合臨床應用所需的標準,，主要是由于該方法得到的外泌體純度不足,，產量較低,，完整性欠佳且分離純化操作耗時長,。其他方法，例如基于聚乙二醇（PEG）的沉淀,，磷脂酰絲氨酸親和捕獲,，尺寸排阻色譜法和膜親和捕獲,，近年來已經出現(xiàn)在特定的應用中，但是只適用于特定場景,。近來,，非對稱流場-流分離方法已被用于從細胞和瘤子培養(yǎng)基中高分辨率地分選EV亞群，但其通量受到繁瑣的樣品制備程序的影響,。單一分析耗時的過程也限制了其普遍的應用,。因此，目前亟需開發(fā)創(chuàng)新技術以提高外泌體分離純化的效率,，純度,，產量，速度和耐用性,?；诔瑸V的技術提供了潛在的有前途的替代方法，但它們也有缺點,。在切向流過濾中,，使進料流平行于多孔膜流動，以避免堵塞,。然而,，盡管已實現(xiàn)使用切向流過濾從大量條件細胞培養(yǎng)基中濃縮外泌體，但受制于其一次性模塊的成本高,，高剪切應力,，難以處理小體積樣品等因素而難以應用于臨床分析。外泌體中含有核酸,，包括miRNA,、DNA、lncRNA,、mRNA,。細菌提取試劑盒報價

PEG沉淀法分離外泌體：通常通過將無水聚合物，如聚乙二醇（PEG）,，與樣品混合來沉淀外泌體,。PEG聚合物競爭性結合水分子，增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力從而沉淀外泌體,，然后通過離心分離外泌體,。這種分離的方法快速，簡便,，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設定,。然而，這種方法缺乏選擇性，PEG聚合物不只會導致外泌體小泡沉淀,，還會引起其他細胞外囊泡,、細胞外蛋白質和蛋白質聚集體沉淀。因此,，在使用這種方法之前,，必須進行樣品預處理，例如過濾或超速離心,，以減少較終的外泌體制劑的污染,。細胞提取試劑盒價錢超速離心是目前分離外泌體的主要技術。

細胞外囊泡是蛋白質,、mRNA,、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體,、微泡和凋亡小體。其中,，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細胞分泌，內含有特定的蛋白質,、脂質,、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關鍵分子,。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應用已經涉及瘤子診療領域,、醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內分泌代謝系統(tǒng)等。超速離心是目前分離外泌體的主要技術,。

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標志物CD63,、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達,，從而實現(xiàn)對外泌體的定量,。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒,，從而導致數(shù)據不準確,。因此,，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細胞術之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號,，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類,。外泌體的提取的方式：免疫磁珠法,。

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,，早先應用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質疑,。2,、試劑盒提取：近幾年來,，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1,、LAMP2,。外泌體 定性

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內皮細胞,、免疫細胞,、血小板、平滑肌細胞等,。細菌提取試劑盒報價

NTA技術已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,，捕捉外泌體的布朗運動，實現(xiàn)顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小,。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據收集和分析參數(shù),，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質聚集體，因此無法排除其他物質干擾,。細菌提取試劑盒報價

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