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外泌體病毒傳染:外泌體可以限制或促進(jìn)病毒傳染,。如IFNα或APOBEC3G等外泌體載體可通過限制病毒復(fù)制或增強(qiáng)抗病毒免疫來(lái)阻止傳染。病毒也可以劫持外泌體的生物發(fā)生機(jī)制來(lái)促進(jìn)病毒的傳播,。外泌體可以作為一個(gè)假包膜,,通過四聚體蛋白(CD81,CD9)和PtSer相互作用增強(qiáng)病毒進(jìn)入受體細(xì)胞,,并幫助逃避抗病毒免疫。病毒組分(蛋白質(zhì)和miRNA)的共轉(zhuǎn)運(yùn)也可能增強(qiáng)傳染性,。外泌體介導(dǎo)的病毒轉(zhuǎn)移可能參與了病毒的遺傳協(xié)同和多重傳染.(CMV,巨細(xì)胞病毒,;HSV-1,1型皰疹病毒)。外泌體的膜同細(xì)胞一樣,,是磷脂雙分子層,。細(xì)胞外泌體和細(xì)胞外囊泡
流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63,、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,可用流式細(xì)胞儀檢測(cè)到陽(yáng)性表達(dá),,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體的定量,。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)時(shí)需要單顆粒懸浮液,當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒,,從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,。因此,為了通過流式細(xì)胞儀觀察,,需要將外泌體通過免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上,,從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細(xì)胞術(shù)之前,,可以在落射熒光顯微鏡(EPI)下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當(dāng)樣品通過流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號(hào),不只可以對(duì)外泌體進(jìn)行高通量分析,,還可以基于抗原表達(dá)對(duì)外泌體進(jìn)行定量或分類,。腦脊液外泌體tmt外泌體可以通過多種方法給藥,靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。
外泌體的生物發(fā)生和鑒定,。液體和細(xì)胞外成分,如蛋白質(zhì),、脂類,、代謝物、小分子和離子,,可以通過內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷,,與細(xì)胞表面蛋白一起進(jìn)入細(xì)胞。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向,。這一出芽過程導(dǎo)致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER),、跨高爾基網(wǎng)絡(luò)(TGN)和線粒體預(yù)先形成的早期核內(nèi)體融合。ESEs也可以與ER和TGN融合,,這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達(dá)它們的,。因此,,一些ESEs可以包含膜和腔的成分,可以表示不同的起源,。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等,。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白,、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA,、DNA、氨基酸和代謝物,。
外泌體為細(xì)胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領(lǐng)域,。外泌體還顯示出了在診療各種疾病(如心肌病和神經(jīng)?。┓矫娴臐摿?。但是,在實(shí)際應(yīng)用外泌體之前,,需要使用大型動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究和臨床試驗(yàn),。同時(shí)需要開發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術(shù)和策略。另外,,在研究和評(píng)估外泌體的副作用和功效時(shí),,必須考慮到肉瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體可能增強(qiáng)肉瘤生長(zhǎng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)。外泌體給藥途徑:給藥途徑是獲得所需功效的重要參數(shù),。外泌體可以通過多種方法給藥,,但是,靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。通過利用增強(qiáng)通透性和保留(EPR)效應(yīng),,在荷瘤動(dòng)物中靜脈內(nèi)遞送外來(lái)體似乎是有用的。在某些容易達(dá)到肉瘤部位的不同惡性肉瘤中,,外泌體療法的給藥途徑是瘤內(nèi)注射,。在疾病部位直接注射外泌體的優(yōu)點(diǎn)是可以特異性地運(yùn)送裝載的藥物。另外口服給藥,,腹腔給藥,,皮內(nèi)給藥和鼻內(nèi)給藥途徑已成功用于外泌體遞送。外泌體的大?。和饷隗w的直徑約30-150nm,。
細(xì)胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用,,包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞,。診療性外泌體對(duì)靶細(xì)胞的影響可能是通過不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來(lái)控制的。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹,、脂筏、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用,。外泌體的內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合,從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中,。超離法是較常用的外泌體純化手段,。外周血外泌體提取試劑盒產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)
外泌體的存在:外泌體幾乎存在于所有的組織、細(xì)胞間隙,、體液中,。細(xì)胞外泌體和細(xì)胞外囊泡
近年來(lái),外泌體的捕獲技術(shù)越來(lái)越多,,微流體系也被用于外泌體提取,,此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,,且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè),。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,,所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長(zhǎng)度。另外,,樣品量的注入速率比較低,,因此,對(duì)于大樣品量,,將需要較長(zhǎng)的處理時(shí)間,。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能。目前,,研究人員已開發(fā)了多種方法來(lái)分離外泌體,,離心技術(shù)仍然是常用方法,其他方法,,例如過濾,、磁珠分離和色譜法等,也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),,但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法,,研究人員應(yīng)針對(duì)不同來(lái)源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。細(xì)胞外泌體和細(xì)胞外囊泡
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