外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體，是具有生物活性的脂雙層囊泡,，大小約為30-100nm,，由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產(chǎn)生和釋放。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用,，并影響細胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應,。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運至靶細胞,。外泌體貨物的組成非常多樣化,，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子,、細胞因子,、細胞受體、脂質(zhì)以及不同的核酸,，例如miRNA和環(huán)狀RNA,。外泌體的提取分離方法：PEG-base沉淀法。黑龍江外泌體lncRNA芯片

根據(jù)內(nèi)侵量的不同,，可以產(chǎn)生不同尺寸,、不同含量的ILV。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體),。MVBs可以與自噬體融合,，較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解。降解產(chǎn)物可被細胞回收利用,。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解,。不遵循這一軌跡的MVBs可通過細胞骨架和微管網(wǎng)絡轉(zhuǎn)運至質(zhì)膜，借助mvb-?？康鞍淄,？吭谫|(zhì)膜的腔側(cè)。隨后胞吐導致具有與質(zhì)膜相似的脂質(zhì)雙分子層方向的外泌體的釋放,。有幾種蛋白參與了外泌體的生物發(fā)生,，包括RabGTPases,、ESCRT蛋白，以及其他也被用作外泌體標記的蛋白(CD9,、CD81,、CD63、flotillin,、TSG101,、神經(jīng)酰胺和Alix)。安徽外泌體Dir一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,。

外泌體分離的主要挑戰(zhàn)之一是消除納米級污染物,，包括干擾外泌體標志物解析的游離核酸和脂蛋白。超速離心是目前分離外泌體的主要技術,。盡管如此,，它仍難以符合臨床應用所需的標準，主要是由于該方法得到的外泌體純度不足,，產(chǎn)量較低,，完整性欠佳且分離純化操作耗時長。其他方法,，例如基于聚乙二醇（PEG）的沉淀,，磷脂酰絲氨酸親和捕獲，尺寸排阻色譜法和膜親和捕獲,，近年來已經(jīng)出現(xiàn)在特定的應用中，但是只適用于特定場景,。近來,，非對稱流場-流分離方法已被用于從細胞和瘤子培養(yǎng)基中高分辨率地分選EV亞群，但其通量受到繁瑣的樣品制備程序的影響,。單一分析耗時的過程也限制了其普遍的應用,。因此，目前亟需開發(fā)創(chuàng)新技術以提高外泌體分離純化的效率,，純度,，產(chǎn)量，速度和耐用性,?；诔瑸V的技術提供了潛在的有前途的替代方法，但它們也有缺點,。在切向流過濾中,，使進料流平行于多孔膜流動，以避免堵塞,。然而,，盡管已實現(xiàn)使用切向流過濾從大量條件細胞培養(yǎng)基中濃縮外泌體,，但受制于其一次性模塊的成本高，高剪切應力,，難以處理小體積樣品等因素而難以應用于臨床分析,。

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,，捕獲并檢測散射的電子,，從而生成粒子圖像。但是,，在TEM中,，不與粒子相互作用的電子穿過樣品，并使用熒光屏進行檢測,。電子顯微鏡下外泌體大小不一,，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高,，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結果造成影響,；另外樣品的準備階段比較復雜，不適合進行大量快速的測量,；而且由于樣本經(jīng)過了干燥,、固定以及冷凍等預處理和制備過程，對生物樣本的結構會造成一定的破壞,，從而影響觀察的效果,，無法準確測量外泌體濃度。外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織,、細胞間隙,、體液中。

外泌體的提取,、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學（電子顯微鏡技術）、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復等,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結構,，能比較好的保護其包被的物質(zhì),，且能靶向特定細胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。腹水外泌體融合實驗外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,，活躍細胞內(nèi)通路。外泌體具有抗原提呈,、免疫逃逸,、誘導正常細胞轉(zhuǎn)化、促進瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用,。外泌體污染的對照

建立外泌體分離,、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題。黑龍江外泌體lncRNA芯片

外泌體遞送藥物的優(yōu)勢：許多新的候選藥物（例如蛋白質(zhì)和核酸）在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定,，對診療結果的效果提出了重大挑戰(zhàn),。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關的問題，外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子,。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產(chǎn)物,，通過外泌體遞送藥物可以避免巨噬細胞的吞噬作用或降解，還可以在體內(nèi)長時間循環(huán),，保持效果,。其中，外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經(jīng)系統(tǒng)是外泌體遞送藥物的一個明顯優(yōu)勢,。黑龍江外泌體lncRNA芯片

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