流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測的準(zhǔn)確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63,、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,，可用流式細(xì)胞儀檢測到陽性表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)對外泌體的定量,。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測時(shí)需要單顆粒懸浮液,，當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,。因此,，為了通過流式細(xì)胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細(xì)胞術(shù)之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當(dāng)樣品通過流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號,，不只可以對外泌體進(jìn)行高通量分析，還可以基于抗原表達(dá)對外泌體進(jìn)行定量或分類,。外泌體由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,，這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細(xì)胞。廣州外泌體鑒定

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,，其大小均一，直徑為40-100nm,，密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和肉瘤細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,，可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等,。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。血漿血清提取試劑盒分類外泌體研究使用血漿樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)較好,。

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成，其大小均一，直徑為40-100nm,，密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能,、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。

胞外囊泡和外泌體的異質(zhì)性,。細(xì)胞外囊泡的兩大類是胞外體和外泌體,。胞外體通過質(zhì)膜出芽釋放，大小在50~1mm之間,。外泌體起源于內(nèi)泌體途徑,，通過形成包含ILVs的ESEs、LSEs,，較終形成多泡體,。當(dāng)MVBs與質(zhì)膜融合時(shí)，外泌體釋放(尺寸范圍~40~160nm),。外泌體是一個(gè)高度異質(zhì)性的群體,，具有獨(dú)特的誘導(dǎo)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的能力。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小,、含量(載物),、對受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來概念化。這些特征的不同組合導(dǎo)致了外泌體的復(fù)雜異質(zhì)性,。外泌體具有異質(zhì)性,，即使是同一種細(xì)胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別。

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性,，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用,。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力,。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報(bào)道,，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,。疾病的進(jìn)展和對診療的反應(yīng)也可以通過外泌體的多組分分析來確定的。在免疫系統(tǒng)中，據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制,。外泌體密度梯度超速離心法

尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體細(xì)胞結(jié)合的途徑,。廣州外泌體鑒定

外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合,，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白,。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1,、2,、4、5,、6,、7、11等）,。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）,、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細(xì)胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來源),、CD86(抗原提呈細(xì)胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細(xì)胞）,。廣州外泌體鑒定

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