外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),,在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,,與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價值,,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),,另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療,。外泌體研究,,應(yīng)選用血漿還是血清?答:血清是血液凝固之后收集的液體,,所以其中少了纖維蛋白原,,凝血因子,以及多了比較多凝血產(chǎn)物,。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,,具有凝血功能。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,,有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌,。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。湖北外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)
研究外泌體介導(dǎo)的microRNA的調(diào)控機(jī)制,,第一步通過microRNA表達(dá)譜的檢測分析來源于肝病細(xì)胞的外泌體。第二步,,應(yīng)用肝細(xì)胞和外泌體共培養(yǎng)實驗得出以下結(jié)論:來源于肝病細(xì)胞的外泌體能促進(jìn)肝病細(xì)胞的生長及遷移侵襲,,且外泌體有運(yùn)輸microRNA至受體細(xì)胞的功能。第三步,,研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個外泌體的重要調(diào)控因子,,與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系,Vps4A基因的表達(dá)下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān),。通過microRNA高通量測序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA,,與肝病的發(fā)生密切相關(guān)。江蘇CD63外泌體慢病毒NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一。
近年來,,外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體,。采用這種方法獲得的樣品純度高,,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,,并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,所需的樣本量取決于流動通道的長度,。另外,,樣品量的注入速率比較低,因此,,對于大樣品量,,將需要較長的處理時間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能,。目前,,研究人員已開發(fā)了多種方法來分離外泌體,離心技術(shù)仍然是常用方法,,其他方法,,例如過濾、磁珠分離和色譜法等,,也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢,,但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法,研究人員應(yīng)針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案,。
外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡,,其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等),,參與細(xì)胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等,。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,,但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣,。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,,調(diào)控細(xì)胞生理活動。同時,,外泌體具有抗原提呈,、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化,、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用,;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送,。1983年,,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。
外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡,,其大小為30-150nm,,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等),,參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,,包括血液,、唾液、尿液,、乳汁等,,同時也存在于組織樣本中,如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,,但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性,,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,,調(diào)控細(xì)胞生理活動,。同時,外泌體具有抗原提呈,、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化,、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用;此外,,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送,。外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用,活躍細(xì)胞內(nèi)通路,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。外泌體的發(fā)展
建立外泌體分離、表征以及效價測定的標(biāo)準(zhǔn)化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題,。湖北外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)
Exosome,,中文名外泌體,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),,但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物,。然而較近幾年,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,,能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。2015年,,隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出,越來越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療,。外泌體作為一個新型的研究熱點,,由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式,,在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景,。外泌體的提取的方式:超速離心法。湖北外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)
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