細(xì)胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細(xì)胞,、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用，包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞,。診療性外泌體對靶細(xì)胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的,。完整的外泌體的進入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹,、脂筏,、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號或融合,，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中,。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域。外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織,、細(xì)胞間隙,、體液中,。組織外泌體iTRAQ

外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體,，是具有生物活性的脂雙層囊泡，大小約為30-100nm,，由不同類型的正常細(xì)胞和瘤子細(xì)胞自然產(chǎn)生和釋放,。這些囊泡在細(xì)胞間通訊中起重要作用，并影響細(xì)胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng),。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運至靶細(xì)胞。外泌體貨物的組成非常多樣化,，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白,、趨化因子、細(xì)胞因子,、細(xì)胞受體,、脂質(zhì)以及不同的核酸，如miRNA和環(huán)狀RNA,。外泌體可以通過多種方法給藥,，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。納米流式 外泌體外泌體的提取的方式：PS親和法,。

細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì),、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細(xì)胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì)、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì)。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。

細(xì)胞外小泡通過充當(dāng)脂肪組織,、肝臟、骨骼肌和免疫細(xì)胞之間的細(xì)胞間通訊方式,，在肥胖及其代謝并發(fā)癥的發(fā)展中發(fā)揮作用,。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調(diào)節(jié)中起作用，外周胰島素敏感性是T2D發(fā)病機理的主要組成部分,。外泌體似乎通過至少兩種不同的機制來調(diào)節(jié)胰島素敏感性,，即通過調(diào)節(jié)炎癥或通過與胰島素反應(yīng)性部位的直接相互作用。后者可通過與主要胰島素信號分子（例如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信號通路）相互作用而影響胰島素信號通路而直接或間接發(fā)生,。與對照組相比,，糖尿病患者的血漿EV含量更高，并且與對照組相比,，糖尿病小鼠的血漿外泌體數(shù)量也更高,。然而，確定外泌體的作用及其在肝/腸軸通訊中的潛在作用將需要對它們的組成有更好的了解,，特別是飲食是否會改變腸源性外泌體的含量,，因此就胰島素反應(yīng)而言它們的生物學(xué)功能尚未研究。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號或融合,。

外泌體發(fā)現(xiàn)于1986年,，是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體，可由機體內(nèi)多種細(xì)胞如免疫細(xì)胞,、干細(xì)胞,、心血管細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞,、血小板,、神經(jīng)細(xì)胞和肉瘤細(xì)胞等主動分泌產(chǎn)生，普遍分布于外周血,、尿液,、唾液,、乳汁、腹水,、羊水等體液中,。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì),，在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移,、促血管新生和抗肉瘤免疫等生理過程,，與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,，使得它具有潛在的應(yīng)用價值,，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)，另一方面也可以作為診療手段,，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療,。干細(xì)胞外泌體攝取流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法。江西鼻腔灌洗液外泌體

外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),。組織外泌體iTRAQ

外泌體分離的主要挑戰(zhàn)之一是消除納米級污染物，包括干擾外泌體標(biāo)志物解析的游離核酸和脂蛋白,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。盡管如此，它仍難以符合臨床應(yīng)用所需的標(biāo)準(zhǔn),，主要是由于該方法得到的外泌體純度不足,，產(chǎn)量較低，完整性欠佳且分離純化操作耗時長,。其他方法,，例如基于聚乙二醇（PEG）的沉淀，磷脂酰絲氨酸親和捕獲,，尺寸排阻色譜法和膜親和捕獲,，近年來已經(jīng)出現(xiàn)在特定的應(yīng)用中，但是只適用于特定場景,。近來,，非對稱流場-流分離方法已被用于從細(xì)胞和瘤子培養(yǎng)基中高分辨率地分選EV亞群，但其通量受到繁瑣的樣品制備程序的影響,。單一分析耗時的過程也限制了其普遍的應(yīng)用,。因此，目前亟需開發(fā)創(chuàng)新技術(shù)以提高外泌體分離純化的效率,，純度,，產(chǎn)量,，速度和耐用性?；诔瑸V的技術(shù)提供了潛在的有前途的替代方法,，但它們也有缺點。在切向流過濾中,，使進料流平行于多孔膜流動,，以避免堵塞。然而,，盡管已實現(xiàn)使用切向流過濾從大量條件細(xì)胞培養(yǎng)基中濃縮外泌體,，但受制于其一次性模塊的成本高，高剪切應(yīng)力,，難以處理小體積樣品等因素而難以應(yīng)用于臨床分析,。組織外泌體iTRAQ

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