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外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成。它也由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,,這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細(xì)胞,。根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫ExoCarta的資料,目前已知約有8000種蛋白質(zhì)和194種脂質(zhì)與外泌體相關(guān),。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細(xì)胞分泌,,包括滑膜液,母乳,,血液,,尿液,唾液,,羊水和血液中的血清,,這表明它們在細(xì)胞間通訊和觸發(fā)生理反應(yīng)中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì),。簡而言之,,它們是天然膜囊泡,將蛋白質(zhì),,RNA,,DNA和脂質(zhì)從一個(gè)細(xì)胞攜帶到另一個(gè)細(xì)胞,調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物功能,。超離法是較常用的外泌體純化手段,。干細(xì)胞外泌體脂質(zhì)組學(xué)
質(zhì)膜的連續(xù)內(nèi)陷較終導(dǎo)致多泡體的形成,多泡體可與細(xì)胞內(nèi)的其他囊泡和細(xì)胞器交叉,,從而增加了外泌體成分的多樣性,。根據(jù)細(xì)胞來源的不同,細(xì)胞外囊泡,,包括外泌體,,可以包含細(xì)胞的許多成分,包括DNA,、RNA,、脂質(zhì)、代謝物、胞質(zhì)和細(xì)胞表面蛋白,。目前產(chǎn)生外泌體的生理目的尚不清楚,,需要進(jìn)一步研究。一個(gè)推測的作用是外泌體可能從細(xì)胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,。近來的研究也表明外泌體中特定細(xì)胞成分的功能,、靶向、機(jī)制驅(qū)動(dòng)的積累,,提示它們在調(diào)節(jié)細(xì)胞間通訊中發(fā)揮作用,。外泌體rna提取步驟優(yōu)化外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)。
外泌體研究背景:胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,,主要由微囊泡,、凋亡小體、外泌體組成,。而外泌體是其中一類小囊泡,,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml,,可攜帶核酸,、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,存在于血液,、唾液,、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實(shí),,外泌體可以通過細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸,、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì),,發(fā)揮特殊的功能,。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、腫細(xì)胞細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展,、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價(jià)和預(yù)后分析,。
胞外囊泡和外泌體的異質(zhì)性,。細(xì)胞外囊泡的兩大類是胞外體和外泌體。胞外體通過質(zhì)膜出芽釋放,,大小在50~1mm之間。外泌體起源于內(nèi)泌體途徑,,通過形成包含ILVs的ESEs,、LSEs,較終形成多泡體。當(dāng)MVBs與質(zhì)膜融合時(shí),,外泌體釋放(尺寸范圍~40~160nm),。外泌體是一個(gè)高度異質(zhì)性的群體,具有獨(dú)特的誘導(dǎo)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的能力,。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小,、含量(載物)、對受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來概念化,。這些特征的不同組合導(dǎo)致了外泌體的復(fù)雜異質(zhì)性,。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1,、LAMP2,。
研究外泌體介導(dǎo)的microRNA的調(diào)控機(jī)制,第一步通過microRNA表達(dá)譜的檢測分析來源于肝病細(xì)胞的外泌體,。第二步,,應(yīng)用肝細(xì)胞和外泌體共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論:來源于肝病細(xì)胞的外泌體能促進(jìn)肝病細(xì)胞的生長及遷移侵襲,且外泌體有運(yùn)輸microRNA至受體細(xì)胞的功能,。第三步,,研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個(gè)外泌體的重要調(diào)控因子,與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系,,Vps4A基因的表達(dá)下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān),。通過microRNA高通量測序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA,與肝病的發(fā)生密切相關(guān),。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,,調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng)。江西外泌體lncRNA芯片
外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA。干細(xì)胞外泌體脂質(zhì)組學(xué)
外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合,有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,,RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?,F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1,、2、4,、5,、6,、7、11等),。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)),、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33(結(jié)腸上皮細(xì)胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來源),、CD86(抗原提呈細(xì)胞來源)以及乳凝集素,。干細(xì)胞外泌體脂質(zhì)組學(xué)
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