PEG沉淀法分離外泌體：通常通過將無水聚合物，如聚乙二醇（PEG）,，與樣品混合來沉淀外泌體,。PEG聚合物競爭性結(jié)合水分子,，增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體,，然后通過離心分離外泌體,。這種分離的方法快速，簡便,，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設(shè)定。然而,，這種方法缺乏選擇性,，PEG聚合物不只會導(dǎo)致外泌體小泡沉淀，還會引起其他細(xì)胞外囊泡,、細(xì)胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀。因此,，在使用這種方法之前，必須進(jìn)行樣品預(yù)處理,，例如過濾或超速離心,，以減少較終的外泌體制劑的污染,。外泌體的大小：外泌體的直徑約30-150nm,。細(xì)胞外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀,？答：這種問題通常有三種可能性,，其一：使用的細(xì)胞上清或者血清量太低,，從而造成了這樣的結(jié)果,。其二：使用了不透明的超速離心管,，一般來說外泌體產(chǎn)量都比較小,，所以凡是不透明的管子,，基本都是比較難見到明顯沉淀的,，可以當(dāng)做有沉淀,，然后操作下去即可。其三：使用了角轉(zhuǎn),。部分品牌離心機(jī)的角轉(zhuǎn)管壁粘附性比較低，超離結(jié)束沒多久沉淀就會滑落下去,，所以請?jiān)陔x心結(jié)束時(shí)趕緊去收樣,。外泌體的角色：1、外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細(xì)胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用,，活躍細(xì)胞內(nèi)通路。2,、外泌體的角色之一：細(xì)胞-細(xì)胞通訊,，比如抗原遞呈,。外泌體與巨噬細(xì)胞外泌體可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送。

外泌體的相關(guān)成分：1,、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,，是磷脂雙分子層,。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈,。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins、RAN,、GTPases,。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide、SM,、PC,，限制膜流動(dòng),，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6,、外泌體中含有核酸，包括miRNA,、DNA,、lncRNA,、mRNA,；同時(shí)還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中,。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6,、PLD2,、RAB家族。8,、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU）,，進(jìn)行主動(dòng)包埋,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成，其大小均一,，直徑為40-100nm,，密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞和肉瘤細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,，可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等,。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體分離之后,，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs,、miRNAs等生物活性物質(zhì)，在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊,、細(xì)胞遷移,、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān),。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,，使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),，另一方面也可以作為診療手段,，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究,，應(yīng)選用血漿還是血清,？答：血清是血液凝固之后收集的液體,，所以其中少了纖維蛋白原,，凝血因子,，以及多了比較多凝血產(chǎn)物,。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，具有凝血功能,。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins,、RAN、GTPases,。山東外泌體PKH26

外泌體實(shí)際應(yīng)用之前,，需要使用大型動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究和臨床試驗(yàn),。細(xì)胞外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

近年來,，外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,，微流體系也被用于外泌體提取,，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體,。采用這種方法獲得的樣品純度高，且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測,。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,，并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,，所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長度,。另外，樣品量的注入速率比較低,，因此,，對于大樣品量,，將需要較長的處理時(shí)間,。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能。目前,，研究人員已開發(fā)了多種方法來分離外泌體,，離心技術(shù)仍然是常用方法,，其他方法,，例如過濾,、磁珠分離和色譜法等,，也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢,，但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法,，研究人員應(yīng)針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。細(xì)胞外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

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