外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足,，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過(guò)濾離心,，這種操作簡(jiǎn)單,、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性,，但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法,，用此種方法分離到的外泌體純度高,，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí),，量少,。尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體細(xì)胞結(jié)合的途徑,。外泌體的研究進(jìn)展

Exosome,，中文名外泌體,，是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),，但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物,。然而較近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸，能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。2015年,，隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出,，越來(lái)越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療。外泌體作為一個(gè)新型的研究熱點(diǎn),，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,，已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式，在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景,。外泌體的提取的方式：超速離心法,。高純度外泌體外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體。

外泌體的提取分離方法：1,、PEG-base沉淀法：聚乙二醇可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體,，其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑,。2,、試劑盒提取：近幾年來(lái),，市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過(guò)特殊設(shè)計(jì)的過(guò)濾器過(guò)濾掉雜質(zhì)成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái),。

外泌體作為細(xì)胞間信使較早發(fā)現(xiàn)于體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中,，是直徑為30~150nm,，密度為1.10~1.18g/ml的細(xì)胞外囊泡,，攜帶豐富的遺傳信息，參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、細(xì)胞遷移、瘤子新生血管生長(zhǎng)和瘤子微環(huán)境形成等過(guò)程,。由于現(xiàn)存的分離技術(shù)是基于外泌體的大小,、結(jié)構(gòu)和膜蛋白的親和捕獲,，比較難完全將其與其他囊泡和大分子蛋白質(zhì)復(fù)合體區(qū)分開,，分離出的外泌體蛋白濃度通常會(huì)被高估,，并且不同亞型外泌體之間可能會(huì)有不同蛋白質(zhì)特征,，所以對(duì)分離的外泌體進(jìn)行鑒定對(duì)于后期研究至關(guān)重要。需要開發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術(shù)和策略,。

外泌體的基本信息：1,、外泌體的大小：外泌體的直徑約40-150nm,。2,、從研究上來(lái)講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。3,、外泌體屬于胞外囊泡類,，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。4,、外泌體的直接比微泡的要小,，后者直徑為100nm-1μm。5,、外泌體的數(shù)量：人體中大約有1014個(gè),，近乎于平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。6,、外泌體的細(xì)胞源：人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,。7、外泌體具有異質(zhì)性,，即使是同一種細(xì)胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別,。8、外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織,、細(xì)胞間隙,、體液中。9,、外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體,。外泌體通過(guò)內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。腦脊液提取試劑盒方法

外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織,、細(xì)胞間隙、體液中,。外泌體的研究進(jìn)展

流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63,、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,，可用流式細(xì)胞儀檢測(cè)到陽(yáng)性表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體的定量,。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)時(shí)需要單顆粒懸浮液,，當(dāng)外泌體濃度高或分離過(guò)程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,。因此,，為了通過(guò)流式細(xì)胞儀觀察，需要將外泌體通過(guò)免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細(xì)胞術(shù)之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當(dāng)樣品通過(guò)流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號(hào),，不只可以對(duì)外泌體進(jìn)行高通量分析，還可以基于抗原表達(dá)對(duì)外泌體進(jìn)行定量或分類,。外泌體的研究進(jìn)展

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