外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足,，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心，這種操作簡單,、省時,，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法,，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜,，耗時,，量少。膜受體的識別是外泌體細胞反應(yīng)的基礎(chǔ),，它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍,。外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸,、誘導(dǎo)正常細胞轉(zhuǎn)化,、促進瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用。黑龍江外泌體Dil

外泌體的提取分離方法：1,、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心、高速離心交替進行,，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,，但過程比較費時,，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑,；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量,。2,、密度梯度離心：在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時。血清去除外泌體外泌體具有異質(zhì)性,，即使是同一種細胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別,。

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質(zhì)細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產(chǎn)生特定的作用,，包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的,。完整的外泌體的進入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏,、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細胞內(nèi)信號或融合,，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細胞質(zhì)中,。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域。

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,，主要由微囊泡,、凋亡小體、外泌體組成,。而外泌體是其中一類小囊泡,，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml,，可攜帶核酸,、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,，存在于血液,、唾液、尿液等多種體液中,。越來越多的研究證實,，外泌體可以通過細胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì),，發(fā)揮特殊的功能,。如在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、腫細胞細胞發(fā)生了發(fā)展,、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預(yù)后分析,。外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性,。外泌體分離之后,，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。

當外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,，其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸,、細胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能,。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型，其可參與到機體免疫應(yīng)答,、抗原提呈,、細胞遷移、細胞分化,、肉瘤侵襲等方方面面,。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,，促進了肉瘤的生長與侵襲,。外泌體其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。腹水外泌體芯片

外泌體是包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30–150nm),，由所有體外和體內(nèi)細胞持續(xù)分泌,。黑龍江外泌體Dil

外泌體的提取分離的方法：1、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心,、高速離心交替進行，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時,，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑,；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量,。2、密度梯度離心：在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,，耗時,。黑龍江外泌體Dil

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