外泌體遞送藥物的優(yōu)勢：許多新的候選藥物（例如蛋白質(zhì)和核酸）在體內(nèi)環(huán)境中高度不穩(wěn)定,，對診療結(jié)果的效果提出了重大挑戰(zhàn)。鑒于與許多當(dāng)前的納米微粒遞送系統(tǒng)相關(guān)的問題,，外泌體作為“自然的遞送系統(tǒng)”允許遞送這些生物分子,。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產(chǎn)物，通過外泌體遞送藥物可以避免巨噬細胞的吞噬作用或降解,，還可以在體內(nèi)長時間循環(huán),，保持效果。其中,，外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經(jīng)系統(tǒng)是外泌體遞送藥物的一個明顯優(yōu)勢,。外泌體鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,，多角度進行鑒定。黑龍江外泌體PKH67

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,，通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,，其大小均一，直徑為40-100nm,，密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標(biāo)記物,、調(diào)控靶細胞功能,、參與細胞生物學(xué)活動等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生；骨髓間充質(zhì)干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿Α?a href="http://18740.cn/zdcbsx/4vvz0il0v9/18314355.html" target="_blank">植物外泌體tmt利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果,。

流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測的準(zhǔn)確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63,、CD81等相應(yīng)抗體進行標(biāo)記,，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現(xiàn)對外泌體的定量,。但流式細胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液,，當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導(dǎo)致一次觀察到多個顆粒，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確,。因此,，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結(jié)合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細胞術(shù)之前，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當(dāng)樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號,，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類,。外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育,，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物,，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體,。該方法相對于ELISA的好處主要是,，珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體，從而提高了分離效率,。此外,，使用磁珠時，樣品起始體積沒有上限,，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL,，且ELISA洗脫雜質(zhì)時容易造成孔間交叉污染。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進行比較時,，磁珠法可分離出更純凈的外泌體,，特異性高、速度更快,，并且不需要昂貴的儀器,。另外，與其他分離方法相比,，磁珠法不影響外泌體形態(tài),。但是采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響,。外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins,、RAN、GTPases,。

外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中,，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白,。除了RAB蛋白,，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2,、4,、5、6,、7,、11等）,。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細胞來源）,、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源),、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細胞）。外泌體發(fā)揮功能：將細胞或組織中多余的或者有害的分子排除,，這為研究生物標(biāo)志物提供了可能,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實現(xiàn)的,。超速離心提取外泌體的過程

外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。黑龍江外泌體PKH67

AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器,，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi)，根據(jù)稱重精確測量流體體積,，可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量,。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨中心孔中并送至廢液桶，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中,。在提取期間,，當(dāng)達到設(shè)定的提取體積后，轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個微量離心管繼續(xù)收集,，到收集完成后自動停止,。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴增效率,，而且由于采用微滴計數(shù)的方法進行定量,，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值，對所測樣品中的核酸分子進行一定定量,。黑龍江外泌體PKH67

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