透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,，在SEM中,，電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,，捕獲并檢測散射的電子,，從而生成粒子圖像。但是,，在TEM中,，不與粒子相互作用的電子穿過樣品，并使用熒光屏進行檢測,。電子顯微鏡下外泌體大小不一,，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高,，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響,；另外樣品的準備階段比較復雜，不適合進行大量快速的測量,；而且由于樣本經(jīng)過了干燥,、固定以及冷凍等預處理和制備過程，對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞,，從而影響觀察的效果,，無法準確測量外泌體濃度。外泌體天然存在于體液中,，包括血液,、唾液、尿液,、腦脊液和乳汁中,。細胞外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi),，根據(jù)稱重精確測量流體體積,，可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨中心孔中并送至廢液桶,，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中,。在提取期間，當達到設定的提取體積后,，轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個微量離心管繼續(xù)收集,，到收集完成后自動停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴增效率,，而且由于采用微滴計數(shù)的方法進行定量,，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值，對所測樣品中的核酸分子進行一定定量,。從研究上來講并不太嚴格區(qū)分外泌體或微泡,。乳液外泌體提取試劑盒外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成,。

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。2,、試劑盒提取：近幾年來,，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,，由于抗體-抗原相互作用，表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上,。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉,，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液,、血漿和血清中分離出外泌體,，當使用標準液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標準曲線時，甚至可以進行定量,。但是,，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預處理。同樣,，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度,。外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡,。外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織,、細胞間隙、體液中,。

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,，通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,，其大小均一，直徑為40-100nm,，密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細胞、淋巴細胞和肉瘤細胞等多種類型細胞主動分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標記物,、調(diào)控靶細胞功能,、參與細胞生物學活動等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生,；骨髓間充質(zhì)干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體具有異質(zhì)性，即使是同一種細胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別,。上清液提取試劑盒原理

外泌體可由間充質(zhì)干細胞,、淋巴細胞和瘤子細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。細胞外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

外泌體的臨床應用：間充質(zhì)干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,，它具有自我更新,，多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體,、免疫調(diào)節(jié),、來源普遍等特點，在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果,。間充質(zhì)干細胞來源外泌體與間充質(zhì)干細胞有著相似的功能,，包括修復與再生組織、阻止炎癥反應及調(diào)節(jié)機體免疫,，但外泌體相對于間充質(zhì)干細胞又有許多優(yōu)勢,。首先，間充質(zhì)干細胞來源外泌體更穩(wěn)定,，更好保存,，易于管理和控制，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量,。其次,，它們沒有活細胞，不會像間充質(zhì)干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重,；另外,，它有可能避免某些針對間充質(zhì)干細胞的調(diào)控問題，間充質(zhì)干細胞來源外泌體有代替間充質(zhì)干細胞的趨勢,。細胞外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

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