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來源: 發(fā)布時間:2023-03-21

近年來,,外泌體的捕獲技術越來越多,微流體系也被用于外泌體提取,,此方法能根據其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設備的內表面,,并在隨后的PBS注射中沖洗掉,。此方法采用的設備復雜,所需的樣本量取決于流動通道的長度,。另外,,樣品量的注入速率比較低,因此,,對于大樣品量,,將需要較長的處理時間。外泌體在包括瘤子在內的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能,。目前,,研究人員已經開發(fā)了多種方法來分離外泌體,離心技術仍然是常用方法,,其他方法,,例如過濾、磁珠分離和色譜法等,,也顯示出獨特的優(yōu)勢,,但目前仍然沒有一種公認有效的提取方法,研究人員應針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案,。外泌體實際應用之前,,需要使用大型動物模型進行進一步研究和臨床試驗。msc外泌體

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外泌體的提取,、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱,。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學性質所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(電子顯微鏡技術)、粒子大小以及標志蛋白等方式實現的,。近來的研究發(fā)現外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移,、組織損傷的修復等,。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體具有脂質雙層膜結構,,能比較好的保護其包被的物質,,且能靶向特定細胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng),。腹水外泌體融合實驗外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,活躍細胞內通路,。杭州外泌體攝取外泌體研究使用血漿樣本進行實驗較好,。

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流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標志物CD63,、CD81等相應抗體進行標記,可用流式細胞儀檢測到陽性表達,,從而實現對外泌體的定量,。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液,當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒,,從而導致數據不準確,。因此,為了通過流式細胞儀觀察,,需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上,,從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細胞術之前,,可以在落射熒光顯微鏡(EPI)下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號,不只可以對外泌體進行高通量分析,,還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類,。外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。

肉瘤細胞可以通過產生異常的抗肉瘤或肉瘤免疫應答并促進瘤子細胞的活動而大量產生外泌體,,這些外泌體富含促病的細胞成分,例如PD-L1,、mRNA和micro-RNA等免疫阻止蛋白,,參與病癥的發(fā)展、轉移和耐藥性,。值得注意的是,,肉瘤分泌的外泌體表面和外泌體顆粒中均存在的PD-L1。ESCRT(運輸所需的內體分選復合體)參與將生物分子包裝到外泌體中,,nSMase2(中性鞘磷脂酶2)和Rab蛋白調節(jié)外泌體分泌,。已確定ESCRT、Rab27a和nSMase2參與外泌體PD-L1的包裝和分泌,。外泌體可以將PD-L1轉運至其他PD-L1表達低或沒有PD-L1的細胞,,并可能與PD-1結合,。一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內環(huán)境的穩(wěn)定。

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細胞外囊泡是蛋白質,、mRNA,、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發(fā)生分為三類,,包括外泌體,、微泡和凋亡小體。其中,,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,,由多種細胞分泌,內含有特定的蛋白質,、脂質,、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,,而且還包含其行使功能的關鍵分子,。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應用已經涉及瘤子診療領域,、醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域,;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內分泌代謝系統(tǒng)等。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(電子顯微鏡技術),、粒子大小以及標志蛋白等方式實現的,。外泌體中的rna

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外泌體為細胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領域,。外泌體還顯示出了在診療各種疾病(如心肌病和神經?。┓矫娴臐摿?。但是,在實際應用外泌體之前,,需要使用大型動物模型進行進一步研究和臨床試驗,。同時需要開發(fā)大規(guī)模生產質量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術和策略。另外,,在研究和評估外泌體的副作用和功效時,,必須考慮到肉瘤細胞來源的外泌體可能增強肉瘤生長的潛在風險。外泌體給藥途徑:給藥途徑是獲得所需功效的重要參數,。外泌體可以通過多種方法給藥,,但是,,靜脈內給藥是較常用的途徑。通過利用增強通透性和保留(EPR)效應,,在荷瘤動物中靜脈內遞送外來體似乎是有用的,。在某些容易達到肉瘤部位的不同惡性肉瘤中,外泌體療法的給藥途徑是瘤內注射,。在疾病部位直接注射外泌體的優(yōu)點是可以特異性地運送裝載的藥物,。另外口服給藥,腹腔給藥,,皮內給藥和鼻內給藥途徑已成功用于外泌體遞送。msc外泌體

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