外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。2,、試劑盒提取：近幾年來,，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。外泌體產(chǎn)生于細胞中的多泡體。血漿外泌體提取試劑盒廠家

外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障（如細胞質(zhì)膜和血/腦屏障）的能力,。這使它們成為理想的診療傳遞分子,。外泌體由于其天然的材料運輸特性，固有的長期循環(huán)能力和出色的生物相容性而具有比較大的潛力成為藥物遞送載體,，其適合于遞送各種化學物質(zhì),，蛋白質(zhì),，核酸和基因診療劑,。（1）外泌體作為小分子的藥物傳遞載體：關(guān)于外泌體遞送姜黃素，多巴胺,，PTX和DOX等化學診療藥物的報道已有充分文獻記載,。（2）外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體：已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體可遞送多種蛋白質(zhì)，例如酶,，細胞骨架蛋白質(zhì)和跨膜蛋白質(zhì),。（3）外泌體作為核酸的藥物遞送載體：研究表明,，外泌體天然的可以攜帶遺傳（例如miRNA，siRNA）到靶細胞中，從而在生物學和致病過程中誘導遺傳修飾,。外泌體的這些特征已成為涉及遺傳療法和使用外泌體進行研究的主要策略。外泌體mirna提取試劑盒推薦建立外泌體分離,、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題,。

血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物,，也可以進行機理研究？首先,，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個亞組：疾病進展期和疾病慢性期,。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白組,，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達，可以作為CLL進展期診斷的輔助標志物。進一步，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應激有關(guān),，而NF-κB通路正是承接此效應的關(guān)鍵通路,。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細胞中，證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào),，進一步活躍NF-κB通路,。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進展期CLL的標志物，并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控,，不斷活躍進展期CLL患者自身PBMC細胞中的NF-κB通路,，促進CLL進展的特殊機理,。

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單,、更能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,，用激光光束穿過樣本,，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,，捕捉外泌體的布朗運動,，實現(xiàn)顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,，繼而估算粒子的大小,。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體，因此無法排除其他物質(zhì)的干擾。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。

外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡,，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,，包括血液,、唾液、尿液、乳汁等，同時也存在于組織樣本中,，如腦組織,、肌肉組織、脂肪組織等,。所有的細胞都能分泌外泌體,，但是不同細胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性,，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣,。外泌體普遍參與細胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞，調(diào)控細胞生理活動,。同時，外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸,、誘導正常細胞轉(zhuǎn)化,、促進瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用；此外,，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用，活躍細胞內(nèi)通路,。外泌體可以將PD-L1轉(zhuǎn)運至其他PD-L1表達低或沒有PD-L1的細胞，并可能與PD-1結(jié)合,。血漿外泌體提取試劑盒應用

外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內(nèi)信號或融合,。血漿外泌體提取試劑盒廠家

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體，通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,，其大小均一,，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL,。外泌體可由間充質(zhì)干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放,。外泌體內(nèi)主要含有核酸,、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標記物,、調(diào)控靶細胞功能,、參與細胞生物學活動等,。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生；骨髓間充質(zhì)干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生,。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿?。血漿外泌體提取試劑盒廠家

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