免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性,，變性后,，通過SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),，然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中。抗體特異性識別膜表面上的抗原，然后將膜暴露于第二抗體中,。通過二抗的熒光標簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測。常用的標記蛋白為CD63,、CD81,、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復性會受到所用抗體質(zhì)量的限制,。外泌體的細胞源：人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體,。細胞提取試劑盒價格

外泌體的相關成分：1、外泌體的膜同細胞一樣,，是磷脂雙分子層。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,，能綁定特異性的肽鏈。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins、RAN,、GTPases,。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide,、SM,、PC，限制膜流動,，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導,、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6,、外泌體中含有核酸，包括miRNA,、DNA,、lncRNA、mRNA,；同時還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中。7,、與外泌體產(chǎn)生相關的重要分子：Ral,、ARF6、PLD2,、RAB家族,。8、一些物質(zhì)進行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU）,，進行主動包埋,。杭州外泌體融合實驗近年來，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應用已經(jīng)涉及醫(yī)學基礎和免疫領域,、寄生蟲領域。

外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,，是具有生物活性的脂雙層囊泡,，大小約為30-100nm，由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產(chǎn)生和釋放,。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用,，并影響細胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細胞外空間,，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運至靶細胞,。外泌體貨物的組成非常多樣化，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白,、趨化因子,、細胞因子,、細胞受體、脂質(zhì)以及不同的核酸,，如miRNA和環(huán)狀RNA,。外泌體可以通過多種方法給藥，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑,。

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評估外泌體形態(tài),、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,，在SEM中,，電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射，捕獲并檢測散射的電子,，從而生成粒子圖像,。但是，在TEM中,，不與粒子相互作用的電子穿過樣品,，并使用熒光屏進行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一,，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響,；另外樣品的準備階段比較復雜,，不適合進行大量快速的測量；而且由于樣本經(jīng)過了干燥,、固定以及冷凍等預處理和制備過程,，對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞，從而影響觀察的效果,，無法準確測量外泌體濃度,。在免疫系統(tǒng)中，據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉(zhuǎn)移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制,。

流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標志物CD63,、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達,，從而實現(xiàn)對外泌體的定量,。但流式細胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液,，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數(shù)據(jù)不準確,。因此,，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結(jié)合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細胞術(shù)之前，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號,，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類,。外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。細胞上清外泌體提取試劑盒產(chǎn)品標準

外泌體可由間充質(zhì)干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放,。細胞提取試劑盒價格

人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體,，包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞,、血小板,、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學活性,。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合,，進而活躍靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中,，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合，從而活躍細胞內(nèi)的信號通路,。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出,。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA,。細胞提取試劑盒價格

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