外泌體與免疫反應,、病毒致病性,、妊娠,、心血管疾病、中樞的神經(jīng)系統(tǒng)相關疾病和病癥進展相關,。由外泌體傳遞到受體細胞的蛋白質(zhì),、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應。這種外泌體介導的反應可以促進或阻止疾病,。外泌體在調(diào)節(jié)復雜的細胞內(nèi)通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途,，包括神經(jīng)退行性疾病和病癥。外泌體可被設計用于遞送不同的診療有效載荷,，包括短干擾,、反義寡核苷酸、化療藥物和免疫調(diào)節(jié)劑,，并具有將其遞送到預期目標的能力,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,。江蘇唾液外泌體

外泌體的提取分離方法：1,、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。2、試劑盒提?。航鼛啄陙?，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。北京外泌體iTRAQ外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,，是具有生物活性的脂雙層囊泡。

外泌體的提取分離方法：1,、PEG-base沉淀法：聚乙二醇可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀,，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。2、試劑盒提?。航鼛啄陙?，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。

外泌體的納米球膜型結構由雙層脂質(zhì)形成,。它也由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,，這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細胞。根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫ExoCarta的資料，目前已知約有8000種蛋白質(zhì)和194種脂質(zhì)與外泌體相關,。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細胞分泌,，包括滑膜液，母乳,，血液,，尿液，唾液,，羊水和血液中的血清,，這表明它們在細胞間通訊和觸發(fā)生理反應中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質(zhì),。簡而言之,，它們是天然膜囊泡，將蛋白質(zhì),，RNA,，DNA和脂質(zhì)從一個細胞攜帶到另一個細胞，從而調(diào)節(jié)受體細胞的生物功能,。外泌體普遍參與細胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞,，調(diào)控細胞生理活動。

NTA技術已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術的樣本處理更簡單,、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,，捕捉外泌體的布朗運動，實現(xiàn)顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小,。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體，因此無法排除其他物質(zhì)干擾,。外泌體為細胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領域,。細胞上清提取試劑盒步驟

提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學（電子顯微鏡技術）,、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的。江蘇唾液外泌體

外泌體的臨床應用：間充質(zhì)干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,，它具有自我更新,，多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體,、免疫調(diào)節(jié),、來源普遍等特點，在臨床診療中取得了良好的成果,。間充質(zhì)干細胞來源外泌體與間充質(zhì)干細胞有著相似的功能,，包括修復與再生組織、阻止炎癥反應及調(diào)節(jié)機體免疫,，但外泌體相對于間充質(zhì)干細胞又有許多優(yōu)勢,。首先，間充質(zhì)干細胞來源外泌體更穩(wěn)定,，更好保存,，易于管理和控制，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量,。其次,，它們沒有活細胞，不會像間充質(zhì)干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重,；另外，它有可能避免某些針對間充質(zhì)干細胞的調(diào)控問題,，間充質(zhì)干細胞來源外泌體有代替間充質(zhì)干細胞的趨勢,。干細胞外泌體攝取流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升,。江蘇唾液外泌體

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