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來源: 發(fā)布時間:2023-04-08

透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態(tài),、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡,。SEM和TEM均使用電子束產生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,,該方法還可用于檢查樣品的純度,。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,在SEM中,,電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,,捕獲并檢測散射的電子,從而生成粒子圖像,。但是,,在TEM中,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,,并使用熒光屏進行檢測,。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形,。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質會對電鏡結果造成影響,;另外樣品的準備階段比較復雜,,不適合進行大量快速的測量;而且由于樣本經(jīng)過了干燥,、固定以及冷凍等預處理和制備過程,,對生物樣本的結構會造成一定的破壞,從而影響觀察的效果,,無法準確測量外泌體濃度,。外泌體的提取的方式:過濾離心。唾液提取試劑盒價錢

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細胞外囊泡是蛋白質,、mRNA,、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,,包括外泌體,、微泡和凋亡小體。其中,,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,,由多種細胞分泌,,內含有特定的蛋白質、脂質,、細胞因子或遺傳物質,。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關鍵分子,。近年來,,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應用已經(jīng)涉及瘤子診療領域,、醫(yī)學基礎和免疫領域,、寄生蟲領域;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內分泌代謝系統(tǒng)等,。腦脊液外泌體攝取超離法是較常用的外泌體純化手段。

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外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種,。它可以調節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內體中,,RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內體?,F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1,、2、4,、5,、6、7,、11等),。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源),、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源),、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素。

NTA技術已被作為外泌體表征手段之一,,相較于其他表征方式NTA技術的樣本處理更簡單,、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快,。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,,用激光光束穿過樣本,激光在腔室內與顆粒相互作用時會發(fā)生散射,,通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,,捕捉外泌體的布朗運動,,實現(xiàn)顆粒可視化,。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,,繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,,包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,,但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù),另外,,NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質聚集體,,因此無法排除其他物質干擾。外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間,,并將各種生物活性分子(貨物)轉運至靶細胞,。

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外泌體的基本信息:1、外泌體的大?。和饷隗w的直徑約40-150nm,。2、從研究上來講并不太嚴格區(qū)分外泌體或微泡,。3,、外泌體屬于胞外囊泡類,除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡,。4,、外泌體的直接比微泡的要小,后者直徑為100nm-1μm,。5,、外泌體的數(shù)量:人體中大約有1014個,近乎于平均每個細胞產生1000-10000個,。6、外泌體的細胞源:人體中幾乎所有類型的細胞均能產生外泌體,。7,、外泌體具有異質性,即使是同一種細胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別,。8,、外泌體的存在:外泌體幾乎存在于所有的組織、細胞間隙,、體液中,。9、外泌體產生于細胞中的多泡體,。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(電子顯微鏡技術),、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的,。干細胞外泌體融合實驗

外泌體屬于胞外囊泡類,除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡,。唾液提取試劑盒價錢

外泌體與免疫反應,、病毒致病性、妊娠,、心血管疾病,、中樞的神經(jīng)系統(tǒng)相關疾病和病癥進展相關。由外泌體傳遞到受體細胞的蛋白質,、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應,。這種外泌體介導的反應可以促進或阻止疾病。外泌體在調節(jié)復雜的細胞內通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途,,包括神經(jīng)退行性疾病和病癥,。外泌體可被設計用于遞送不同的診療有效載荷,包括短干擾,、反義寡核苷酸,、化療藥物和免疫調節(jié)劑,并具有將其遞送到預期目標的能力,。唾液提取試劑盒價錢

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