細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,，包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì),、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子,，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子。近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域、醫(yī)學基礎和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。在免疫系統(tǒng)中,，據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉(zhuǎn)移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制。外泌體裂解

外泌體的相關(guān)成分：1,、外泌體的膜同細胞一樣,，是磷脂雙分子層。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,，能綁定特異性的肽鏈。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins、RAN,、GTPases,。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide,、SM、PC，限制膜流動,，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導,、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6,、外泌體中含有核酸，包括miRNA,、DNA,、lncRNA、mRNA,；同時還有一些蛋白,、脂類也能被包裹到外泌體中。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral,、ARF6、PLD2,、RAB家族,。8、一些物質(zhì)進行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU）,，進行主動包埋,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。北京外泌體miRNA芯片外泌體分離之后,，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質(zhì)細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產(chǎn)生特定的作用,，包括新抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的,。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內(nèi)吞作用,、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏,、吞噬作用,、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內(nèi)信號或融合,，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細胞質(zhì)中,。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應用已經(jīng)涉及醫(yī)學基礎和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域,。

AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi),，根據(jù)稱重精確測量流體體積,，可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨中心孔中并送至廢液桶,，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中,。在提取期間，當達到設定的提取體積后,，轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個微量離心管繼續(xù)收集，到收集完成后自動停止,。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴增效率,，而且由于采用微滴計數(shù)的方法進行定量，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,，對所測樣品中的核酸分子進行一定定量,。外泌體存在于組織樣本中，如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等。

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,，然后將磁珠與樣品共孵育,，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復合物，再用蒸餾水或者PBS沖洗,，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體,。該方法相對于ELISA的好處主要是，珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體,，從而提高了分離效率,。此外，使用磁珠時,，樣品起始體積沒有上限,，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL，且ELISA洗脫雜質(zhì)時容易造成孔間交叉污染,。當將磁珠法與金標準外泌體分離方法進行比較時,，磁珠法可分離出更純凈的外泌體，特異性高,、速度更快,，并且不需要昂貴的儀器。另外,，與其他分離方法相比,，磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響,。外泌體具有異質(zhì)性,，即使是同一種細胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別。外泌體試劑盒

外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿ΑＭ饷隗w裂解

外泌體的生物發(fā)生和鑒定,。液體和細胞外成分,，如蛋白質(zhì)、脂類,、代謝物,、小分子和離子，可以通過內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷,，與細胞表面蛋白一起進入細胞,。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向。這一出芽過程導致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng),、跨高爾基網(wǎng)絡(TGN)和線粒體預先形成的早期核內(nèi)體融合,。ESEs也可以與ER和TGN融合，這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達它們的,。因此,，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源,。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等,。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白,、細胞內(nèi)蛋白、RNA,、DNA,、氨基酸和代謝物。外泌體裂解

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