外泌體的提取,、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體,。另外利用外泌體自身的物理化學性質所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學,、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的,。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞,、瘤子的生長與遷移,、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體具有脂質雙層膜結構，能比較好的保護其包被的物質,，且能靶向特定細胞或組織,，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。臨床前研究的證據(jù)表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復的潛在無細胞治理劑,。海洋生物外泌體tmt

結果表明,，PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質和RNA。應用Tim4的外泌體強結合能力,，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測,、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡，也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取,。本指導書中對該技術進行詳細說明,，這項技術的有用性今后將受到世界各方評價，有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻,。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即：對各種外泌體的分類,。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細胞外囊泡可以稱之為外泌體，給實驗數(shù)據(jù)的分析和重復性確認帶來困難,。近年,，隨著國際細胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦,，提案MISEV指南作為國際標準,，計劃或已經開始進行EV研究的科學家請務必閱讀這些方針。海洋生物外泌體NTA外泌體被認為是疾病的生物標志物和預后因子,，具有重要的臨床診斷和治理意義,。

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內皮細胞,、免疫細胞,、血小板、平滑肌細胞等,。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,，外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸,、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性,。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合，進而活躍靶細胞細胞內的信號通路,。二是在細胞外基質中,，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,，從而活躍細胞內的信號通路,。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,，非選擇性的釋放其所含的蛋白質,、mRNA以及microRNA。

外泌體（Exosome）開始被認為是毫無作用的“垃圾”,，但隨著研究的不斷深入,，人們發(fā)現(xiàn)事實并非如此，外泌體（Exosome）是具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞的微囊泡,。外泌體（Exosome）介導瘤細胞的免疫耐受,。瘤細胞來源的外泌體（Exosome）本身可作為瘤抗原,，因此，瘤來源的外泌體（Exosome）既是一種抗原呈遞系統(tǒng),，同時也是瘤排斥抗原的來源。瘤來源的外泌體（Exosome）能夠通過傳遞某些抑制信號,，在機體免疫應答過程中起負性調節(jié)作用,，誘導瘤細胞形成免疫耐受，從而逃避免疫細胞的殺傷,。外泌體在體液中十分穩(wěn)定,，同時外囊泡所含的蛋白質和RNA被外泌體的脂質雙層膜所包被也不會分解。

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記,，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現(xiàn)對外泌體的定量,。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液,，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數(shù)據(jù)不準確,。因此,，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細胞術之前，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號,，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類,。外泌體是細胞在特定條件下分泌的小囊泡,，是細胞間傳遞信號，相互溝通和影響的重要工具,。海洋生物外泌體tmt

外泌體可通過其攜帶的蛋白質,、核酸、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性,。海洋生物外泌體tmt

外泌體本身的惰性相當高,，但它們與細胞膜融合可將所攜帶的物質和信號傳遞到受體細胞并改變其生物學功能，因此,，外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體,。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質的天然載體也引起了藥物遞送領域的極大興趣,，因為它可以利用這些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物,。外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術突破,，要將其用于臨床治理，外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產還面臨很大的挑戰(zhàn),。首先,，對外泌體的具體合成機制、功能了解并不是非常詳細,。其次,，現(xiàn)在缺乏經濟有效的外泌體分離技術。海洋生物外泌體tmt

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