外泌體的提取分離方法：1,、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。2,、試劑盒提?。航鼛啄陙恚袌錾弦殉霈F(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,，有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。外泌體在免疫調(diào)控,、肉瘤轉(zhuǎn)移和血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域發(fā)揮著非常重要的作用,。外泌體自動收集儀

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,，然后將磁珠與樣品共孵育，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物,，再用蒸餾水或者PBS沖洗,，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主要是,，珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體,，從而提高了分離效率。此外,，使用磁珠時,，樣品起始體積沒有上限，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL,，且ELISA洗脫雜質(zhì)時容易造成孔間交叉污染,。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時，磁珠法可分離出更純凈的外泌體,，特異性高,、速度更快，并且不需要昂貴的儀器,。另外,，與其他分離方法相比，磁珠法不影響外泌體形態(tài),。但是采用磁珠法時,，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。遼寧干細(xì)胞外泌體應(yīng)用Tim4的外泌體強結(jié)合能力,，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測,、定量分析外泌體,。

Exosome，中文名外泌體,，是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),，但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。2015年，隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出,，越來越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療,。外泌體作為一個新型的研究熱點，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性,，已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式,，在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。

肉瘤細(xì)胞可以通過產(chǎn)生異常的抗肉瘤或肉瘤免疫應(yīng)答并促進(jìn)瘤子細(xì)胞的活動而大量產(chǎn)生外泌體,，這些外泌體富含促病的細(xì)胞成分,，例如PD-L1、mRNA和micro-RNA等免疫阻止蛋白,，參與病癥的發(fā)展,、轉(zhuǎn)移和耐藥性。值得注意的是,，肉瘤分泌的外泌體表面和外泌體顆粒中均存在的PD-L1,。ESCRT（運輸所需的內(nèi)體分選復(fù)合體）參與將生物分子包裝到外泌體中，nSMase2（中性鞘磷脂酶2）和Rab蛋白調(diào)節(jié)外泌體分泌,。已確定ESCRT,、Rab27a和nSMase2參與外泌體PD-L1的包裝和分泌。外泌體可以將PD-L1轉(zhuǎn)運至其他PD-L1表達(dá)低或沒有PD-L1的細(xì)胞,，并可能與PD-1結(jié)合,。在抗原呈遞細(xì)胞中的外泌體發(fā)揮作用的報道后，人們對外泌體的興趣增強,。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1,、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高,、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,，不便進(jìn)行下一步的實驗,。2、PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合,，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整,，純度較高。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性,，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。3,、色譜法,，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不普遍,。外泌體作為核酸的藥物遞送載體,。不同肝臟疾病中,，細(xì)胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異。遼寧干細(xì)胞外泌體

采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響,。外泌體自動收集儀

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今,，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),，1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中,，包括血液,、唾液、尿液,、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,，參與細(xì)胞間通訊,，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。外泌體自動收集儀

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