通過改變外泌體的溶解性或者分散性,可以將它們從體液或細胞培養(yǎng)液中沉淀出來,。常見的方法是使用聚乙二醇或凝集素來沉淀樣品中的外泌體,。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物,不含水的聚乙二醇可以通過“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力,從而迫使其脫離溶液,進而在低速離心條件下發(fā)生沉降,。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結合蛋白,可通過與外泌體質膜糖蛋白上的糖鏈結合來改變外泌體的溶解性,。此外,還可使用魚精蛋白,、醋酸鈉,、有機溶劑沉淀等方法進行沉淀分離,。采用磁珠法時,，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響,。研究外泌體的方法

細胞分泌到細胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡是內源性和質膜起源的不同類型的膜囊泡。這些細胞外囊泡（EVs）表示了細胞間通訊的一個重要模式,，作為膜和細胞溶質蛋白,、脂質和RNA細胞之間傳遞的載體。泌體是細胞內源性的小囊泡,，由大多數細胞分泌,。在抗原呈遞細胞中的外泌體發(fā)揮作用的報道后，人們對外泌體的興趣增強,，并且觀察到它們可以在體內刺激免疫應答,。在過去幾年中，有幾個實驗室報道了各種細胞類型的外泌體分泌,，并討論了其潛在的生物學功能,。然而，我們對于EV形成的分子機制知識的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內生理相關性的探索,。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成,、定位和功能的機制,。凱杰外泌體提取試劑盒利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運輸到目標細胞中。

在外泌體中引入藥物的方式包括體內裝載和體外裝載兩種,。體內藥物裝載可以通過傳統方法(如病毒轉染,、脂質體轉染或電穿孔等)轉染來源細胞，編碼感興趣的RNA或蛋白質,，也可以使藥物與來源細胞共混,，使細胞分泌產生含有目標生物分子的外泌體。體外藥物裝載則首先需要得到純化的外泌體,，然后將感興趣的藥物通過電穿孔或脂質體轉染等方法裝入純化的外泌體,。外泌體內可裝載的藥物包括小分子化學藥物、蛋白質和多肽,、核酸藥物,、天然產物等。

外泌體的組成較為復雜,，其內含有多種生物大分子,，如：核酸（雙鏈DNA和各種RNA亞型）、蛋白質和脂質,。這些分子被外泌體攜帶進入血液循環(huán),，而后被靶細胞吸收，從而調節(jié)靶細胞基因表達和細胞功能,。此外,，外泌體相關的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子，調節(jié)致病基因或抑病基因的表達,，參與細胞分化,、細胞凋亡及細胞信號的傳導。有研究表明,，外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成,、增強種瘤細胞的侵襲和轉移能力、介導種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進而促進種瘤的發(fā)展,。超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法,。

唾液中包含來自于唾液腺上皮體外細胞的外泌體，Michael等從唾液中提取外泌體,，并對唾液外泌體中的miRNA進行分析,，發(fā)現此類miRNA有望作為成為唾液腺疾病的生物標志物。Wu等成功從汗液中提取得到外泌體,，并進行蛋白質組學分析,，在汗液外泌體中鑒定到1062種蛋白質，其中包含多種抗jun肽和免疫因子,，表明汗液外泌體參與皮膚免疫,。Liu等從患有阿爾茲海默癥患小鼠的腦脊髓液中提取得到外泌體,，并與野生型小鼠進行對比，發(fā)現實驗組miR-193b明顯下調,。外泌體的異質性可以根據其大小,、含量(載物)、對受體細胞的功能影響以及細胞來源來區(qū)分,。成都血漿外泌體

外泌體的復雜性,，為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標的診斷窗口。研究外泌體的方法

利用蛋白質免疫印跡和酶聯免疫吸附分析技術可以對外泌體標志性蛋白質進行定性定量分析,。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經典表征手段之一,，操作時往往需要細胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標志性蛋白質包括四跨膜蛋白質CD63,、CD81,、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101),、水通道蛋白2(AQP2,，尿液中)和凋亡誘導因子6相互作用蛋白(Alix)等，內參蛋白質可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶,，陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB,，線粒體標志蛋白)或鈣聯結蛋白Calnexin。在酶聯免疫吸附析法中,，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質,，隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣,、耗時長的問題,，相比較而言，酶聯免疫吸附分析法比蛋白質免疫印跡法更加快速,，適用于高通量分析。研究外泌體的方法

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