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外泌體中的mirna提取

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-08-14

在免疫系統(tǒng)中,淋巴細(xì)胞,、樹突狀細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等均可以產(chǎn)生外泌體,。研究表明免疫細(xì)胞來源的外泌體能夠明顯影響機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,,包括調(diào)節(jié)抗原呈遞、免疫激huo,、免疫監(jiān)督等,。不同免疫細(xì)胞來源的外泌體功能不同,以樹突狀細(xì)胞(該細(xì)胞具有免疫刺激能力,,是目前能夠激huo初始T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞)來源的外泌體為例,,其外泌體的免疫刺激作用取決于來源細(xì)胞的成熟狀態(tài)。成熟的樹突狀細(xì)胞外泌體內(nèi)包含能夠直接激huoT細(xì)胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ,,共刺激分子如CD40,、CD8、CD86和熱激蛋白,這些分子使樹突狀細(xì)胞來源的外泌體具有抗原呈遞,、調(diào)節(jié)免疫響應(yīng)的生物功能,。癥狀細(xì)胞來源的外泌體含有與癥狀進(jìn)展相關(guān)的分子。外泌體中的mirna提取

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外泌體作為細(xì)胞外囊泡的一個(gè)亞群,直徑集中于30~150nm,。目前,基于粒徑大小分離外泌體的方法有超濾法,、尺寸排除色譜法、靜水過濾透析法和非對(duì)稱場(chǎng)流分離法等,。超濾法利用不同孔徑的濾膜,對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離以獲得外泌體,一般分為壓力超濾和離心超濾,。其中離心超濾效果更好,不jin能減輕力對(duì)外泌體的破壞,而且可通過增大離心力和延長(zhǎng)離心時(shí)間提高外泌體產(chǎn)物濃度。但離心力過大或離心時(shí)間過長(zhǎng)均有可能導(dǎo)致超濾膜或外泌體破裂,。此外,超濾法可以和切向流過濾法,、微控流法、超速離心法或凝膠過濾色譜法等方法結(jié)合進(jìn)一步提高分離效率,。外泌體在國內(nèi)是什么時(shí)候開始用的細(xì)胞外囊泡(EVs)表示了細(xì)胞間通訊的一個(gè)重要模式。

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利用抗ai癥藥物進(jìn)行中流zhiliao是抑制中流的一個(gè)重要方法,不過目前抗ai癥藥物的運(yùn)載存在著種種挑戰(zhàn),,主要體現(xiàn)在以下幾點(diǎn):(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體清chu,,體內(nèi)循環(huán)的半衰期很短等,。采用外泌體運(yùn)輸抗ai癥藥物,,可以提高藥物體系的水溶性,,降低藥物對(duì)人體的毒性以及避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉從而延長(zhǎng)其循環(huán)時(shí)間,。近期,兩種抗ai癥藥物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已經(jīng)成功被載入外泌體中,并對(duì)其抗中流作用進(jìn)行了研究,。

外泌體是具有雙層脂膜的囊泡結(jié)構(gòu),其穩(wěn)定性較好,可保護(hù)內(nèi)部生物分子免受體液中各種酶的影響,從而保持其完整性和生物活性。外泌體被提取后一般懸浮于磷酸鹽緩沖液,。目前,常用的儲(chǔ)存方法為冷凍保存,但是冷凍保存可能會(huì)導(dǎo)致外泌體形狀與物理性質(zhì)的改變,也可能導(dǎo)致多層囊泡的形成和聚集,反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致外泌體表面分子的生物特性、含量和標(biāo)志物組成發(fā)生變化,。血清中包含外泌體在內(nèi)的細(xì)胞外囊泡DNA在不同儲(chǔ)存環(huán)境可保持穩(wěn)定,血漿存放于4°C時(shí)其RNA會(huì)明顯降解,在–20°C下長(zhǎng)期保存也會(huì)導(dǎo)致血漿中外泌體總RNA降解,但miRNA卻十分穩(wěn)定,這也提示了外泌體miRNA作為生物標(biāo)志物的潛力。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小,、含量(載物),、對(duì)受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來區(qū)分,。

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人體內(nèi)多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,,包括干細(xì)胞,、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞,、血小板及平滑肌細(xì)胞等,。外泌體被包裹在堅(jiān)硬的雙層膜中,。雙層膜保護(hù)外泌體的內(nèi)容物,使外泌體能夠在組織中長(zhǎng)距離移動(dòng),。干細(xì)胞外泌體因在上皮組織的增殖,、遷移、再生,、炎癥和瘢痕控制等方面的作用,,有望成為“無細(xì)胞的細(xì)胞治理”工具,。干細(xì)胞來源的外泌體可通過囊泡,,將干細(xì)胞的精華部分——mRNA、miRNA,、IncRNA及蛋白質(zhì)等生物活性物質(zhì),打包運(yùn)出干細(xì)胞體外,。通過“細(xì)胞間高速公路”來“快遞”到人體各個(gè)組織內(nèi),。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,,也通過運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。安徽外泌體tmt

外泌體可以作為藥物治理的遞送系統(tǒng)。外泌體中的mirna提取

在利用外泌體運(yùn)輸PTX進(jìn)行抗中流的研究中,,由于間充質(zhì)干細(xì)胞可以歸巢(homing)至中流細(xì)胞微環(huán)境并且可以不通過基因操作即可對(duì)PTX運(yùn)輸,,因此Pessina等采用間充質(zhì)干細(xì)胞SR4987作為分泌外泌體的母代細(xì)胞,,而后將SR4987與PTX共混,,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來,,研究其對(duì)體外人胰腺ai細(xì)胞株的影響,。結(jié)果表明外泌體可以有效的運(yùn)載PTX并不破壞其功能,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047~0.095mg/mL之間時(shí)可以誘導(dǎo)中流細(xì)胞凋亡50%,,這種抑制效果與純PTX對(duì)體外ai細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)。外泌體中的mirna提取

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