為了解決外泌體實(shí)驗(yàn)遇到的上述的各種問(wèn)題,Wako研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS(MagCapture?ExosomeIsolationKitPS)提取高純度細(xì)胞外囊泡,。外泌體膜含有分泌細(xì)胞源的蛋白和脂質(zhì),,眾所周知磷脂酰絲氨酸(PS)在活細(xì)胞通過(guò)翻轉(zhuǎn)酶作用導(dǎo)向細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),,暴露在外泌體膜外側(cè)3),。另外,,T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4(Tim4通過(guò)巨噬細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞凋亡的吞噬受體)蛋白通過(guò)細(xì)胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4),?;谏鲜鲋R(shí),我們利用Tim4固化磁珠,,在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體,,再添加螯合劑洗脫外泌體,這種外泌體純化方法是和金澤大學(xué)醫(yī)學(xué)系免疫學(xué)華山教授共同開(kāi)發(fā),,并取得了成功,。5)這是迄今為止取代黃金標(biāo)準(zhǔn)超速離心法的新型外泌體純化方法。外泌體可以作為藥物治理的遞送系統(tǒng),。外泌體nta檢測(cè)步驟
目前為止已鑒別了2500余種miRNAs分子,。例如,血液外泌體miR-21的升高已被證實(shí)與胰腺ai,、結(jié)直腸ai,、肝ai、乳腺ai,、卵巢ai及食管ai等多種中流相關(guān),,可能與其參與中流xue管生成有關(guān),研究表明肺ai細(xì)胞釋放的外泌體miR-21會(huì)通過(guò)STAT3依賴(lài)機(jī)制誘導(dǎo)周?chē)夤芗?xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor,,VEGF)的產(chǎn)生,,從而促進(jìn)血管生成。在食管ai中,,miR-21還可以反映中流的惡性程度,,食管ai患者的miR-21水平與良性中流患者相比急劇上升,上升的miR-21水平也與中流的淋巴侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。在膀胱ai患者中,,尿液中的miR-21和miR-4454會(huì)明顯上調(diào),。研究所提取試劑盒免疫印跡法(WB)和Elisa檢測(cè)法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測(cè)的一般方法。
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,,參與細(xì)胞間通訊,,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā),。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂,。研究發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌的exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進(jìn)入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì),,不只是mRNA,,exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性,在進(jìn)入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平,。
在Rameshwar等的研究中,,采用轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞的方法,使外泌體載有anti-miR-9,。在進(jìn)行間充質(zhì)細(xì)胞和多形性成角質(zhì)細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞間anti-miR-9傳遞的實(shí)驗(yàn)時(shí),,發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞不僅可以通過(guò)縫隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊(GJIC)也可以通過(guò)外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細(xì)胞(U87和T98G)對(duì)中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實(shí)現(xiàn),,而非經(jīng)GJIC傳遞的anti-miR-9,,顯示出外泌體在運(yùn)載miRNA進(jìn)行基因zhiliao時(shí)的潛力。利用外泌體進(jìn)行GBM的zhiliao不只停留在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上,,也已經(jīng)有相關(guān)的體內(nèi)zhiliao報(bào)道,。外泌體的異質(zhì)性決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)要根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類(lèi)型、目標(biāo)組織的特點(diǎn)等進(jìn)行針對(duì)性的調(diào)整,。
外泌體調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能,,延長(zhǎng)毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)期,同時(shí)活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊,,使其提前進(jìn)入新的生長(zhǎng)周期,,實(shí)現(xiàn)了毛發(fā)的再次生長(zhǎng)。骨衰老小鼠注射外泌體試驗(yàn)證明:年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機(jī)。來(lái)源于脂肪組織中的干細(xì)胞分泌一些信號(hào)分子和生長(zhǎng)因子,,可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長(zhǎng)周期的毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞進(jìn)行分化,,向上遷移生成表皮細(xì)胞和皮脂腺,向下遷移生成毛母細(xì)胞,。毛發(fā)根部的囊的生長(zhǎng)周期決定毛發(fā)的生長(zhǎng)周期,,而毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機(jī)能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度,外泌體靶向調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的功能,。臨床前研究的證據(jù)表明干細(xì)胞釋放的外泌體可作為心肌修復(fù)的潛在無(wú)細(xì)胞治理劑,。外泌體nta檢測(cè)步驟
外泌體中含有豐富的蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì)DNA以及RNA等。外泌體nta檢測(cè)步驟
在過(guò)去十年中,,細(xì)胞外囊泡已經(jīng)成為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì),,參與原核生物和高等真核生物細(xì)胞之間的生物信號(hào)傳遞,以調(diào)節(jié)不同范圍的生物過(guò)程,。此外,,細(xì)胞外囊泡的病理生理作用開(kāi)始在包括癥狀、傳播性疾病和神經(jīng)變性疾病在內(nèi)的疾病中得到認(rèn)識(shí),,突出了醫(yī)治干預(yù)的潛在新靶點(diǎn),。此外,未修飾和工程化的細(xì)胞外囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應(yīng)用,。該綜述回顧近在理解細(xì)胞外膜泡生物學(xué)和細(xì)胞外囊泡在疾病中的作用方面的進(jìn)展,,討論新出現(xiàn)的醫(yī)治機(jī)會(huì)并考慮相關(guān)的挑戰(zhàn)。外泌體nta檢測(cè)步驟