中流細胞分泌的外泌體可以通過體液進入特定qi官,,建立有利于ai細胞生長的微環(huán)境,包括促進受體細胞上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,、引發(fā)炎癥,、促進血管生成,為ai細胞的擴散形成有利條件,。進一步研究發(fā)現(xiàn)中流細胞外泌體能夠引導(dǎo)ai癥轉(zhuǎn)移至特定qi官,,在膜表面特異性整合素的作用下,中流細胞外泌體首先在特定的qi官累積,,引起受體qi官產(chǎn)生炎癥,、生成血管,形成有利于中流轉(zhuǎn)移的微環(huán)境,,使得中流細胞更容易轉(zhuǎn)移至該qi官,。Maji等揭示了惡性中流細胞外泌體中的AnnexinⅡ蛋白能夠促進血管生成,為中流轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利的微環(huán)境,。有望將外泌體應(yīng)用在各種疾病醫(yī)治上,。乳液外泌體提取試劑盒應(yīng)用
血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定,將血清在4°C短期保存期間即發(fā)生降解,這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導(dǎo)致的。–80°C保存被公認(rèn)是保存各種生物標(biāo)本如尿,、牛奶,、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境,雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體。4°C保存雖然容易導(dǎo)致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過程造成的囊泡破壞,。外泌體雖然建議保存于-80°C環(huán)境下,但在處理或運輸過程中有時很難維持這種低溫條件,。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過程中使用海藻糖作為保護劑,海藻糖可以提供生物保護作用,如穩(wěn)定蛋白質(zhì)、細胞膜和脂質(zhì)體;減少冷凍過程中冰的形成;防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集;減少分離和保存過程中細胞外囊泡的損失等,。海洋生物外泌體iTRAQPS親和法提取的外泌體,,其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上。
獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應(yīng)用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測量,,但兩種方法也各有不足,。動態(tài)光散射法中散射光強度依賴于顆粒質(zhì)量(體積),混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴(yán)重影響測量結(jié)果,,因此動態(tài)光散射法更適用于單分散體系,。而且動態(tài)光散射法所得的結(jié)果強烈依賴于所應(yīng)用的數(shù)學(xué)算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進行檢測時,,為了得到準(zhǔn)確的濃度和粒徑信息,,需要根據(jù)所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準(zhǔn),操作繁瑣,。受檢測靈敏度所限,,納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm~1μm的顆粒,粒徑小于50nm的外泌體無法檢測,。除此之外,,兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進行分析,,難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡,。
外泌體基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床應(yīng)用的探索和深入研究對如何準(zhǔn)確及高純度提取外泌體,并完整保存提出了更高的技術(shù)要求,。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質(zhì)組分,并在100000×g~200000×g的轉(zhuǎn)速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術(shù)被認(rèn)為是外泌體分離的“金標(biāo)準(zhǔn)”,也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法,。該方法可通過結(jié)合0.22μm或0.45μm孔徑濾膜進行超濾來提高產(chǎn)物純度減少外泌體的聚集,其分離效率容易受到加速度,、轉(zhuǎn)子類型、旋轉(zhuǎn)半徑,、沉降路徑長度以及樣品黏度等多種因素影響,。外泌體在組織修復(fù)領(lǐng)域均起著重要的作用,并且可以作為很好靶向給藥系統(tǒng),。
雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優(yōu)勢,但在臨床應(yīng)用上仍有一些限制:外泌體的提取方法金標(biāo)準(zhǔn)仍然是差速離心法,,但這種方法費時費力且提取效率較低,,難以進行臨床推廣和應(yīng)用;而商業(yè)化的試劑盒質(zhì)量參差不齊,,往往導(dǎo)致提取物雜質(zhì)過多,,且其售價較高。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量,,蛋白濃度定量,,亦或是核酸濃度定量,目前仍存有爭議,。由于傳統(tǒng)的內(nèi)參并不適用于外泌體,,在實時熒光定量PCR檢測靶分子含量時內(nèi)參的選擇尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。外泌體分子標(biāo)志物的研究還處于初級階段,。目前外泌體研究的整個流程中成本都很高,。外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測出,特別是血液中釋放的病細胞來源的外泌體,。海洋生物外泌體iTRAQ
外泌體可參與到機體免疫應(yīng)答,、抗原提呈、細胞遷移,、細胞分化等方方面面,。乳液外泌體提取試劑盒應(yīng)用
外泌體(Exosome)開始被認(rèn)為是毫無作用的“垃圾”,但隨著研究的不斷深入,,人們發(fā)現(xiàn)事實并非如此,,外泌體(Exosome)是具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞的微囊泡。外泌體(Exosome)介導(dǎo)瘤細胞的免疫耐受,。瘤細胞來源的外泌體(Exosome)本身可作為瘤抗原,,因此,,瘤來源的外泌體(Exosome)既是一種抗原呈遞系統(tǒng),同時也是瘤排斥抗原的來源,。瘤來源的外泌體(Exosome)能夠通過傳遞某些抑制信號,,在機體免疫應(yīng)答過程中起負(fù)性調(diào)節(jié)作用,誘導(dǎo)瘤細胞形成免疫耐受,,從而逃避免疫細胞的殺傷,。乳液外泌體提取試劑盒應(yīng)用