前列腺ai患者尿液外泌體中的miR-574-3p、miR-141-5p和miR-21-5p的表達(dá)水平明顯上升，表明這些miRNAs可用于前列腺ai的早期篩查,。膽管ai是惡性程度較高的消化系統(tǒng)中流，發(fā)展隱蔽且臨床癥狀及體征出現(xiàn)晚,，故給早期診斷帶來(lái)困難。高通量小RNA測(cè)序篩查了來(lái)自膽管ai和膽囊ai患者外泌體中一系列差異表達(dá)的miRNA,，小RNA長(zhǎng)度在正常個(gè)體,、膽管ai患者和膽囊ai患者之間的分布存在明顯差異，膽管ai患者的外泌體中miR-96-5p,、miR-151a-5p,、miR-191-5p、miR-4732-3p明顯升高,，而膽囊ai患者的外泌體中miR-151a-5p略有升高,，為膽管ai和膽囊ai提供了一套新的生物診斷標(biāo)志物,。在抗原呈遞細(xì)胞中的外泌體發(fā)揮作用的報(bào)道后,，人們對(duì)外泌體的興趣增強(qiáng)。exosome diagnostics

所有真核細(xì)胞類(lèi)型包括造血細(xì)胞,、上皮細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞,、脂肪細(xì)胞和病癥細(xì)胞均可在培養(yǎng)條件下分泌外泌體,。體內(nèi)所有體液，包括血液,、唾液,、腦脊液、腹水,，甚至尿液中都可以分離得到外泌體,。這些外泌體傳輸多種信號(hào)分子,，包括蛋白質(zhì)、信使核糖核酸（mRNA）和非編碼核糖核酸（RNA）,，其攜帶的分子可以被其他細(xì)胞吸收,。因此，外泌體可以將生物信息轉(zhuǎn)移到相鄰細(xì)胞,。這種細(xì)胞間通信不只涉及生理功能,，還涉及一些疾病的發(fā)病機(jī)理，包括瘤,、心血管疾病和神經(jīng)退行性疾病等,。外泌體提取文獻(xiàn)隨著今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰,，并擴(kuò)大臨床應(yīng)用,。

在20世紀(jì)80年代，外泌體被描述為從網(wǎng)織紅細(xì)胞分泌的內(nèi)體來(lái)源的囊泡,。人們對(duì)這些細(xì)胞外囊泡的興趣逐漸增加,，因?yàn)樗鼈兯坪鯀⑴c了很多細(xì)胞過(guò)程。外泌體攜帶蛋白質(zhì),、脂質(zhì)和RNAs,，介導(dǎo)體內(nèi)不同細(xì)胞類(lèi)型之間的細(xì)胞間通訊，從而影響正常和病理狀態(tài),。只有近,，科學(xué)家才認(rèn)識(shí)到將外泌體與其他類(lèi)型的細(xì)胞外囊泡分開(kāi)的困難，這排除了特定功能對(duì)不同類(lèi)型分泌的囊泡的明確歸因,。為了闡明這個(gè)復(fù)雜但正在發(fā)展的科學(xué)領(lǐng)域,，該綜述著重于外泌體和其他分泌的細(xì)胞外囊泡的定義。討論了它們的生物發(fā)生,，分泌及其后續(xù)的命運(yùn),，因?yàn)樗鼈兊墓δ芤蕾囉谶@些重要過(guò)程。

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù),。該方法需預(yù)先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖,、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶,。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時(shí)樣品在向超速離心管底部移動(dòng)時(shí),會(huì)通過(guò)密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過(guò)密度更高的梯度層,更快地到達(dá)管底,因此控制離心的時(shí)間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會(huì)根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來(lái)進(jìn)行組合,離心過(guò)程中,無(wú)論離心時(shí)間多久,不同密度顆粒jin會(huì)富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會(huì)沉淀到底部,。外泌體在化療藥物的促轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要的作用。

為獲得外泌體的大小,、濃度,、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息，可以通過(guò)電鏡、動(dòng)態(tài)光散射,、納米顆粒跟蹤分析儀,、蛋白質(zhì)免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附法,、流式細(xì)胞儀等對(duì)外泌體進(jìn)行表征,。通過(guò)電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息，不同類(lèi)型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同,，得到的外泌體形態(tài)存在差異,。例如，在掃描電鏡,、透射電鏡和原子力顯微鏡中,，外泌體呈現(xiàn)囊泡獨(dú)有的茶托形，可能由于樣品在固定或染色過(guò)程中極度脫水,，導(dǎo)致外泌體塌陷所致,。與之相反，在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形,，由于不會(huì)脫水變性,，所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實(shí)狀態(tài)。另外,，由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率,，也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度、粒徑分布等信息,。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長(zhǎng),、細(xì)胞遷移、抗病毒等生理過(guò)程,。外泌體提取文獻(xiàn)

從外泌體中篩選的生物標(biāo)志物,，可用于疾病的診斷、預(yù)后及治理,。exosome diagnostics

隨著科學(xué)研究的不斷深入,，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體是由通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體，多泡內(nèi)涵體再與細(xì)胞膜融合后,，釋放到細(xì)胞外基質(zhì)中的一種直徑約30~120nm的膜性囊泡,。外泌體介導(dǎo)瘤細(xì)胞的化療抵抗,。在瘤的治理過(guò)程中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)藥物耐受的情況,，這會(huì)導(dǎo)致化療失敗，在這和過(guò)程中外泌體以多種途徑參與了化療抵抗這一過(guò)程,。通常,，發(fā)生EMT過(guò)程的瘤細(xì)胞可獲得抵抗凋亡能力，而抵抗凋亡通常使瘤表現(xiàn)為化療抵抗。瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體能通過(guò)傳遞相關(guān)的組織因子(如VEGF,、TGF2β)介導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生EMT,，從而增加瘤細(xì)胞的化療抵抗能力。exosome diagnostics