?血清應(yīng)如何保存,?未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃,,避免反復(fù)凍融,。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃,,2~8℃溶解后建議盡快使用。?血清的有效期是多久,?大部分血清效期是5年,,針對每個批次,請通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期,。?血清應(yīng)如何融解,?取出的血清置于2~8℃融化,,不時旋轉(zhuǎn)混勻,,充分融解后分裝或使用。?為什么有時血清中出現(xiàn)絮狀沉淀,?是否需要去除,?如何去除?多種原因可能導(dǎo)致絮狀沉淀的形成,,比較常見的原因之一是融化過程中,,脂蛋白聚集所致。該現(xiàn)象一般不會影響產(chǎn)品質(zhì)量,??梢?00g離心5分鐘,取上清,,然后過濾,。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑,一般比較常用的是0.22umPES材質(zhì)的濾膜,。為避免濾膜阻塞,,建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。因為牛血清中很多營養(yǎng)物質(zhì)是熱敏感物質(zhì),,只能通過過濾的方式來除菌和除支原體--云海生物,。濰坊豬血清廠家
可以起到營養(yǎng)物質(zhì)的作用,動物在代謝的進程中所需的養(yǎng)分包含水,、無機鹽,、維生素、糖類,、脂肪,、氨基酸和纖維素等,。這些成分動物血清都能夠供給給體外培育的動物細胞,但這些養(yǎng)分物質(zhì)(除水以外)的含量在動物血清中所占的份額很少,,并且首要的養(yǎng)分物質(zhì)在動物細胞培育基的制造中現(xiàn)已增加了,。所以,從這些視點看動物細胞培育參加的動物血清雖然能起到為培育的動物細胞供給養(yǎng)分物質(zhì)的效果,,但這并不是首要的效果,。細胞貼壁鋪展在塑料培育基質(zhì)上所需因子來歷是動物細胞培育的一個很重要的用途就是用取自燒傷患者皮膚的健康細胞進行培育,能夠獲得許多本身的皮膚細胞,,為大面積燒傷的患者移植,。人工皮膚的制備需求培育的細胞貼附在薄膜上構(gòu)成皮膚組織,血清就為這個進程供給所需因子,。濰坊豬血清廠家巧在人們發(fā)現(xiàn)這些成分不耐受高溫,,所以才有了熱滅活處理。
抗血清的采集與保存家兔是很常用以產(chǎn)生抗體的動物,,因此這里主要討論兔血的收集,。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血,,鼠等小動物取血可參閱有關(guān)資料,。取兔血有兩種方法,一是耳緣靜脈或耳動脈放血,,一是頸動脈入血,,也可心臟采集血。取動脈或靜脈放血時,,將免放入一個特造的木匣或籠內(nèi),,耳露于箱(籠) 外,也可由另一人捉住兔身,。剪去耳緣的毛,,用少許二甲苯涂抹耳廓,30s后,,耳血管擴張,、充血。用手輕拉耳尖,,以單面剃須刀或尖的手術(shù)刀片,快速切開動脈或靜脈,,血液即流出,每次可收集30~40ml,。然后用棉球壓迫止血,,凝血后洗去二甲苯。二星期后,可在另一耳放血,。此法可反復(fù)多次放血,。頸動脈放血時,將免仰臥,,固定于兔臺,,剪去頸部的毛,切開皮膚,,暴露頸動脈,,插管,放血,。放血過程中要嚴(yán)格按無菌要求進行,。收集的血液置于室溫下1h左右,凝固后,,置4°C下,,過夜 (切勿冰凍) 析出血清,離心,,4000rpm,,10min。在無菌條件,,吸出血清,,分裝 (0.05~0.2ml) ,,貯于-40°C以下冰箱,,或凍干后貯存于4。C冰箱保存,。
細胞培養(yǎng)中使用血清的缺點-無血清培養(yǎng)基血清成分復(fù)雜,,雖含許多對細胞有利成分,也含有對細胞有害的成分,,使血清有幾個明顯的缺點:對大多數(shù)細胞,,在體內(nèi)狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學(xué)液體,,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),血清可能促進某些細胞的生長如成纖維細胞,,同時抑制另一類細胞生長如表皮細胞,。血清含一些對細胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(yīng)(如精胺,、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體,、細菌毒類素等都會影響細胞生長,,甚至造成細胞死亡。動物個體不同,,血清產(chǎn)地,、批號不同,每批質(zhì)量差異甚大,,其成分不能保持一致,。取材中可能帶入支原體、病毒,,對細胞產(chǎn)生潛在影響,,可能導(dǎo)致實驗失敗或?qū)嶒灲Y(jié)果不可靠性。血清的使用使得實驗和生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化困難,,其中的蛋白質(zhì)使得某些轉(zhuǎn)基因蛋白生物藥品生產(chǎn)中分離純化工作很難完成,。在生長因子、蛋白質(zhì)工程,、基因表達調(diào)控等研究領(lǐng)域,,迫切需要用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物-云海生物,。
血清,,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后,,分離出的淡黃色透明液體(理論上)或指纖維蛋白原已被除去的血漿,。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、各種生長因子,、結(jié)合蛋白,、促接觸和生長因子,使細胞貼壁免受機械損傷,、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用,。其實,細胞培養(yǎng)從上個世紀(jì)開始發(fā)展至今,,經(jīng)歷了多個階段:1885年Roux生理鹽水培育雞胚組織,;1903-1906年Jolly和Beebe等發(fā)明了懸滴培養(yǎng);1907年Harrison培養(yǎng)蛙胚神經(jīng)成功,;1910,、1912年Carrel完善了懸滴培養(yǎng)法;1923年Carral設(shè)計創(chuàng)立了卡氏瓶培養(yǎng)法,;隨后培養(yǎng)器具不斷推陳出新,,塑料瓶,、皿、多孔培養(yǎng)板的使用逐漸普遍,。在培養(yǎng)基方面也經(jīng)歷了巨大變革,,天然培養(yǎng)基?合成培養(yǎng)基雞胚浸出液?動物血清直至60年代出現(xiàn)無血清培養(yǎng)基。在微生物的培育中要為培育的微生物供給成長因子,。德州豬血清培養(yǎng)基
動物不同,,分離出的血清也會有所不同。濰坊豬血清廠家
如何進行血清滅活處理,?血清請先按上述「血清應(yīng)如何融解」中的操作步驟融化和混勻,,熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質(zhì)的影響,,一次滅活的血清體積不宜過大,。比較好準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水(與血清相同溫度),滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴,在裝水的容器中放置溫度計,,加熱過程中不時輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清,,當(dāng)溫度計顯示達到56℃左右,開始計時,。56℃水浴后,,建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。濰坊豬血清廠家
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