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羊血清培養(yǎng)基

來源: 發(fā)布時間:2023-02-16

為什么存放于冰箱中的血清會出現沉淀,?如何避免該現象,?在2~8°C條件下存放,,血清中的多種蛋白或脂蛋白會形成肉眼可見的沉淀,如血纖蛋白(fibrin),,單體時處于溶解狀態(tài),,在凍融過程中會發(fā)生聚集,形成肉眼可見的沉淀,。但該現象一般不會影響血清的性能,。可以400g離心5分鐘,,取上清,然后過濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑,,一般比較常用的是0.22umPES材質的濾膜,。為避免濾膜阻塞,建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內一起過濾而不是直接過濾血清,。為盡量避免出現上述現象,,建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱,避免反復凍融和融化后的血清在2~8°C條件下長時間放置,。在對細胞和活疫苗進行支原體檢驗中,,《獸藥典》也明確推薦了豬血清作為支原體檢驗用液體培養(yǎng)基的組成成分。羊血清培養(yǎng)基

抗血清的采集與保存家兔是很常用以產生抗體的動物,,因此這里主要討論兔血的收集,。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血,,鼠等小動物取血可參閱有關資料,。取兔血有兩種方法,一是耳緣靜脈或耳動脈放血,,一是頸動脈入血,,也可心臟采集血。取動脈或靜脈放血時,,將免放入一個特造的木匣或籠內,,耳露于箱(籠) 外,也可由另一人捉住兔身,。剪去耳緣的毛,,用少許二甲苯涂抹耳廓,30s后,,耳血管擴張,、充血。用手輕拉耳尖,,以單面剃須刀或尖的手術刀片,快速切開動脈或靜脈,,血液即流出,每次可收集30~40ml,。然后用棉球壓迫止血,,凝血后洗去二甲苯。二星期后,,可在另一耳放血,。此法可反復多次放血。頸動脈放血時,,將免仰臥,,固定于兔臺,,剪去頸部的毛,切開皮膚,,暴露頸動脈,,插管,放血,。放血過程中要嚴格按無菌要求進行,。收集的血液置于室溫下1h左右,凝固后,,置4°C下,,過夜 (切勿冰凍) 析出血清,離心,,4000rpm,,10min。在無菌條件,,吸出血清,,分裝 (0.05~0.2ml) ,貯于-40°C以下冰箱,,或凍干后貯存于4,。C冰箱保存。濟南馬血清生產廠細胞培養(yǎng)時,,要保證細胞可以順利生長和增殖,,需添加10%~20%的血清,動物血清還可起到酸堿度緩沖液的作用,。

鑒別方法,,血清血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內抽出,,放入試管中,,不加抗凝劑,則凝血反應被煥液迅速凝固,,形成膠凍,。凝血塊收縮,其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清,,也可于凝血液成分(加入抗凝劑)血后經離心取得,。在凝血過程中,纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊,,所以血清中無纖維蛋白原,,這一點是與血漿比較大的區(qū)別。而在凝血反應中,,血小板釋放出許多物質,,各凝血因子也都發(fā)生了變化,。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化,如凝血酶原變成凝血酶,,并隨血清存放時間逐漸減少以至消失,。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應的物質則與血漿基本相同,。為避免抗凝劑的干擾,血液中許多化學成分的分析,,都以血清為樣品,。血漿血漿是血液的液體成分,血細胞懸濁于其中,。人體含有2750-3300毫升血漿,,約占血液總體積的55%。血漿的絕大部分是水(體積的90%),,其中溶解的物質主要是血漿蛋白,,還包括葡萄糖、無機鹽離子,、以及二氧化碳,。血漿的主要功能是運載血細胞,同時也是運輸分泌產物的主要媒介,。將新鮮血液離心,,使血細胞沉降,上層淡黃色清液即是血漿,。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子,。

?血清應如何保存?未拆封的血清應存放于-15至-20℃,,避免反復凍融,。拆封后的血清應無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃,2~8℃溶解后建議盡快使用,。?血清的有效期是多久,?大部分血清效期是5年,針對每個批次,,請通過質檢文件確定具體效期日期,。?血清應如何融解?取出的血清置于2~8℃融化,,不時旋轉混勻,,充分融解后分裝或使用。?為什么有時血清中出現絮狀沉淀,?是否需要去除,?如何去除,?多種原因可能導致絮狀沉淀的形成,比較常見的原因之一是融化過程中,,脂蛋白聚集所致,。該現象一般不會影響產品質量??梢?00g離心5分鐘,,取上清,然后過濾,。根據需要選擇合適的濾膜孔徑,,一般比較常用的是0.22umPES材質的濾膜。為避免濾膜阻塞,,建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內一起過濾而不是直接過濾血清,。采集血量達到采集血管容積的 1/3 為宜,不要超過 2/3,。

馬血清一般分為兩種:第一種馬血清含有的大分子蛋白比較多,,適用于蛋白封閉;第二種馬血清為細胞培養(yǎng)級別,。它經過多次過濾,,祛除了許多大分子蛋白,但保留了血清中促細胞生長的活性因子,,因而能用于細胞培養(yǎng),,例如神經細胞培養(yǎng)時,培養(yǎng)基中則需要添加馬血清,。質量的馬血清來自健康馬血液,,為封閉系統內無菌采集血過濾而成,為淡黃色澄清液體,,很低內毒類素,,無溶血,無異物,,無細菌,、、支原體,、噬菌體等,。豬血清,常用于豬肺炎支原體疫苗的生產,。在對細胞和活疫苗進行支原體檢驗中,,《獸藥典》也明確推薦了豬血清作為支原體檢驗用液體培養(yǎng)基的組成成分。并且,,《獸藥典》指出在【豬支原體肺炎微量間接血凝試驗】和【豬支氣管敗血波氏桿菌凝集試驗】中需要陰性血清,,即質量的豬血清,,血源必然來自健康動物。如果在37℃或更高的溫度解凍血清,,血清中會出現沉淀,。濰坊豬血清哪家好

至于某一株細胞適應什么樣的血清濃度,還需要根據細胞特性,、實驗目的做測試和調校,。羊血清培養(yǎng)基

血清保存方法1.如何保存血清?血清應該在-20℃保存,。如果一次無法用完一瓶,,應該無菌分裝后冷凍保存。注意避免反復凍融,。2.為什么儲存在冰箱中的血清會出現沉淀?有些胎牛血清產品沒有預老化,,儲存在2-8℃時,,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,,避免反復凍融,。凍融方法正確解凍方法:將血清首先置于冰箱2-8℃中12-24小時,使之緩慢部分溶解,,然后再放在室溫下使之全溶,。注意:溶解過程中要每隔一段時間緩慢地搖動血清使之混勻。切記:避免37℃水浴,。羊血清培養(yǎng)基

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