紡錘體觀測(cè)儀使ICSI更加安全可靠

在進(jìn)行單精子卵胞漿內(nèi)注射（ICSI）授精時(shí)，**初人們觀察人體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞時(shí),，通常認(rèn)為,，卵母細(xì)胞紡錘**于***極體附近,，故傳統(tǒng)的ICSI操作是轉(zhuǎn)動(dòng)卵母細(xì)胞使其***極**于6點(diǎn)或12點(diǎn)處,，然后在3點(diǎn)處注入精子,。但是,，在大量使用紡錘體觀測(cè)儀后發(fā)現(xiàn),，***極體并不能很好地預(yù)測(cè)紡錘體的位置。一項(xiàng)研究提示,，在ICSI后,，用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體與***極體的夾角，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小于30°這組卵母細(xì)胞的正常受精率更高,。極體在卵周隙中的移動(dòng),，或者紡錘體在胞質(zhì)中的易位都使兩者的位置關(guān)系發(fā)生改變,，普通光學(xué)顯微鏡下ICSI穿刺部位的選擇，可能會(huì)損傷紡錘體和(或)造成染色體的異常,。通過紡錘體觀測(cè)儀,，可以精確地對(duì)卵母細(xì)胞中紡錘體的位置進(jìn)行定位，從而避免在ICSI過程中損傷紡錘體,，使ICSI更加安全可靠,。有文獻(xiàn)報(bào)道，在進(jìn)行ICSI時(shí),，觀察到“雙折射紡錘體”的成熟卵母細(xì)胞的受精率和質(zhì)量胚胎率***高于未觀察到雙折射紡錘體組,。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，有些卵母細(xì)胞在普通光學(xué)顯微鏡下看到是正常的,，但在紡錘體觀測(cè)儀這個(gè)“照妖鏡”下,，就能顯出原形，表現(xiàn)為有***極體,、但缺乏雙折射的紡錘體,，這類卵母細(xì)胞ICSI后的受精率和妊娠率極低。 紡錘體微管網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性保證了染色體分離的準(zhǔn)確性,。偏光成像紡錘體觀測(cè)儀

核移植和紡錘體卵冷凍都是高度精細(xì)的技術(shù)操作,，需要嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件和豐富的操作經(jīng)驗(yàn)。任何微小的失誤都可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或胚胎發(fā)育異常,。因此，提高技術(shù)操作的精細(xì)度和成功率,，是核移植紡錘體卵冷凍研究的重要方向,。近年來(lái)，隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和研究的深入,，核移植紡錘體卵冷凍研究取得了進(jìn)展,。研究者們通過優(yōu)化冷凍保護(hù)劑配方、改進(jìn)冷凍解凍方法,、加強(qiáng)紡錘體穩(wěn)定性保護(hù)等手段,，有效提高了核移植后胚胎的發(fā)育潛力和質(zhì)量。例如,，有研究者采用低濃度的冷凍保護(hù)劑配方,，結(jié)合快速冷凍和解凍技術(shù)，降低了紡錘體在冷凍過程中的損傷程度,。同時(shí),，他們還利用顯微操作技術(shù)精確地將體細(xì)胞核移入去核卵母細(xì)胞的特定位置，提高了重新編程的成功率,。這些研究成果為核移植紡錘體卵冷凍技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展和應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ),。ICSI紡錘體胚胎植入研究紡錘體有助于理解細(xì)胞分裂的分子機(jī)制,。

在生殖醫(yī)學(xué)與輔助生殖技術(shù)的快速發(fā)展中，卵母細(xì)胞的冷凍保存技術(shù)顯得尤為重要,。然而,，卵母細(xì)胞，尤其是其內(nèi)部的紡錘體結(jié)構(gòu),，對(duì)低溫環(huán)境極為敏感,，冷凍過程中的損傷往往影響解凍后卵母細(xì)胞的存活率及發(fā)育潛能。偏光成像技術(shù),，特別是Polscope偏振光顯微成像系統(tǒng),，結(jié)合了液晶可變減速器、電子成像及數(shù)碼成像技術(shù),，能夠捕捉到具有雙折性特征的細(xì)胞結(jié)構(gòu),，如紡錘體。紡錘體由微管等高分子物質(zhì)有序排列而成,，這些物質(zhì)能夠使偏振光發(fā)生折射現(xiàn)象,，從而被檢偏器捕捉并通過偏振光顯微鏡觀察。這一技術(shù)無(wú)需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定和染色,，能夠動(dòng)態(tài)評(píng)估卵母細(xì)胞的質(zhì)量與紡錘體的相關(guān)性,，為卵母細(xì)胞冷凍保存的研究提供了新的手段。

紡錘體功能分解

      在細(xì)胞分裂中,，其主要作用有兩個(gè)部分,。其一為排列與分裂染色體。紡錘體的完整性決定了染色體分裂的正確性,。紡錘體的正常生成是染色體排列的必要條件,。紡錘體生成完畢后一般會(huì)有5-20分鐘的延遲，以供細(xì)胞調(diào)整著絲點(diǎn)上微管束的極性,，以及決定是否所有的著絲點(diǎn)都附著正確,。此后細(xì)胞進(jìn)入分裂后期，染色體分裂為兩組數(shù)目相等的姐妹染色單體,。同樣,，紡錘體的完整性決定這個(gè)分裂過程在時(shí)間和空間上的準(zhǔn)確性。

      紡錘體另一功能為決定胞質(zhì)分裂的分裂面,。染色體分裂的同時(shí),，紡錘體中的一部分微管不隨染色體分裂到兩極，而停弛在紡錘體**,， 形成紡錘**體(central spindle),。在紡錘中體的**為兩組極性相反的微管交疊的區(qū)域，稱為紡錘**區(qū)(spindle midzone).此**區(qū)就是接下來(lái)的胞質(zhì)分裂面,。胞質(zhì)分裂開始于分裂后期的較晚期,。胞質(zhì)分裂一般結(jié)束于分裂末期后1-2小時(shí),，此期間兩個(gè)子細(xì)胞由中心顆粒體(midbody)連接。 一般認(rèn)為紡錘體的分解發(fā)生在細(xì)胞分裂末期,。 紡錘體在細(xì)胞分裂完成后迅速解體,，為細(xì)胞進(jìn)入下一個(gè)周期做準(zhǔn)備。

秋水仙素會(huì)使動(dòng)物細(xì)胞染色體加倍嗎微管蛋白按照來(lái)源可分為植物微管蛋白和動(dòng)物腦蛋白,。因植物微管蛋白難以制備,，秋水仙堿與動(dòng)物腦微管蛋白結(jié)合反應(yīng)研究得要更多一些。秋水仙堿是從植物秋水仙中提純出的一種生物堿,，又名秋水仙素,，構(gòu)成微管的α、β微管蛋白異源二聚體是秋水仙素分子的結(jié)合靶點(diǎn),。當(dāng)秋水仙堿與正在進(jìn)行有絲分裂的細(xì)胞接觸時(shí),，秋水仙堿結(jié)合到微管蛋白的特定位點(diǎn)，導(dǎo)致α微管蛋白與β微管蛋白二聚體結(jié)構(gòu)變形,，從而阻斷微管蛋白組裝成微管,，但并不影響微管蛋白的解聚，所以紡錘體會(huì)迅速消失,。

秋水仙堿的濃度和作用時(shí)間對(duì)動(dòng),、植物細(xì)胞染色體加倍的影響是關(guān)鍵。有研究結(jié)果表明,，在花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂細(xì)線期與粗線期進(jìn)行美洲黑楊2n花粉的誘導(dǎo)效果比較好,，總體上在減數(shù)分裂粗線期進(jìn)行誘導(dǎo)得到的2n花粉**多，并且誘導(dǎo)的比較好濃度為0.5%,。劉愛生等在利用人類外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行染色體G顯帶制作中,，在阻斷培養(yǎng)的4h內(nèi)任意時(shí)間加入相應(yīng)劑量的秋水仙素，能獲得用于G顯帶的形態(tài)完好,、大小適中、分散均勻,、輪廓清楚的中期染色體標(biāo)本相,。陳長(zhǎng)超等利用秋水仙堿處理MⅠ期卵母細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ml期紡錘體發(fā)生解聚,，染色體周圍紡錘體微管全部消失或部分殘留,，染色體排列異常。 紡錘體微管的動(dòng)態(tài)不穩(wěn)定性是其功能的基礎(chǔ),。昆明ICSI紡錘體卵細(xì)胞評(píng)價(jià)

紡錘體微管的動(dòng)態(tài)變化是細(xì)胞對(duì)外界刺激響應(yīng)的一部分,。偏光成像紡錘體觀測(cè)儀

近年來(lái)，隨著玻璃化冷凍技術(shù)的不斷發(fā)展,，成熟卵母細(xì)胞紡錘體的冷凍保存研究取得了進(jìn)展,。研究表明,，采用玻璃化冷凍法冷凍保存的成熟卵母細(xì)胞，在解凍后其紡錘體和染色體的形態(tài)及功能均能得到較好的保持,。這主要得益于玻璃化冷凍過程中避免了冰晶形成對(duì)細(xì)胞的損傷,，以及冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的有效保護(hù)。然而,，值得注意的是,，盡管玻璃化冷凍法在提高解凍存活率和妊娠成功率方面取得了成效，但仍存在一些問題,。例如,，冷凍過程中紡錘體的微管結(jié)構(gòu)可能受到低溫的影響而發(fā)生解聚，導(dǎo)致染色體分離異常,。此外,，冷凍保護(hù)劑的毒性也可能對(duì)卵母細(xì)胞造成一定的損傷。為了克服這些問題,，研究者們進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)和優(yōu)化工作,。例如，通過改進(jìn)冷凍保護(hù)劑的配方和濃度,，降低其對(duì)細(xì)胞的毒性,；通過優(yōu)化冷凍速率和程序，減少冷凍過程中對(duì)細(xì)胞的機(jī)械損傷,；以及通過篩選和評(píng)估不同冷凍載體和保存時(shí)間對(duì)卵母細(xì)胞冷凍效果的影響,，尋找好的冷凍保存條件。偏光成像紡錘體觀測(cè)儀