在生殖醫(yī)學(xué)與輔助生殖技術(shù)的快速發(fā)展中，卵母細(xì)胞的冷凍保存技術(shù)顯得尤為重要。然而,，卵母細(xì)胞，尤其是其內(nèi)部的紡錘體結(jié)構(gòu),，對低溫環(huán)境極為敏感，冷凍過程中的損傷往往影響解凍后卵母細(xì)胞的存活率及發(fā)育潛能,。偏光成像技術(shù),，特別是Polscope偏振光顯微成像系統(tǒng)，結(jié)合了液晶可變減速器,、電子成像及數(shù)碼成像技術(shù),，能夠捕捉到具有雙折性特征的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，如紡錘體,。紡錘體由微管等高分子物質(zhì)有序排列而成,，這些物質(zhì)能夠使偏振光發(fā)生折射現(xiàn)象，從而被檢偏器捕捉并通過偏振光顯微鏡觀察。這一技術(shù)無需對細(xì)胞進(jìn)行固定和染色,，能夠動態(tài)評估卵母細(xì)胞的質(zhì)量與紡錘體的相關(guān)性,，為卵母細(xì)胞冷凍保存的研究提供了新的手段。紡錘體的形成與細(xì)胞骨架的重構(gòu)密切相關(guān),。深圳卵母細(xì)胞紡錘體玻璃底培養(yǎng)皿

隨著科技的進(jìn)步,，冷凍與解凍技術(shù)也在不斷創(chuàng)新。例如,，玻璃化冷凍技術(shù)因其快速冷凍和解凍的特點(diǎn)，能夠有效減少冷凍過程中的冰晶形成和滲透壓變化對紡錘體的損傷,。此外,，一些研究者還嘗試將微流控技術(shù)應(yīng)用于卵母細(xì)胞的冷凍保存中，以實(shí)現(xiàn)更精確的溫度控制和更均勻的冷凍保護(hù)劑分布,。無損觀察技術(shù)如偏光顯微鏡（Polscope）和冷凍電鏡（Cryo-EM）等的應(yīng)用為MI期紡錘體卵冷凍研究提供了新的視角,。這些技術(shù)能夠在不破壞卵母細(xì)胞活性的情況下實(shí)時(shí)觀察紡錘體的形態(tài)和變化，從而更準(zhǔn)確地評估冷凍保存的效果,。無損觀察紡錘體Oosight Meta紡錘體形成過程中的任何錯(cuò)誤都可能影響細(xì)胞的命運(yùn),。

光學(xué)相干斷層成像是一種基于低相干光干涉原理的成像技術(shù)，具有高分辨率,、非侵入性和實(shí)時(shí)成像等特點(diǎn),。在紡錘體卵冷凍研究中，OCT技術(shù)可用于觀察卵母細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的細(xì)微變化,，包括紡錘體的形態(tài)和位置,。雖然目前OCT技術(shù)在紡錘體成像方面的應(yīng)用還較為有限，但隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和完善,，相信未來OCT將在紡錘體卵冷凍研究中發(fā)揮更加重要的作用,。雖然MRI和超聲波成像在生殖醫(yī)學(xué)中主要用于軟組織的成像，如子宮,、卵巢等病變檢測,，但它們在紡錘體卵冷凍研究中的應(yīng)用也值得探討。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步,，高分辨率MRI和超聲波成像技術(shù)可能會實(shí)現(xiàn)對卵母細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的更精細(xì)觀察,。

卵母細(xì)胞冷凍保存主要采用兩種方法：慢速冷凍法和玻璃化冷凍法。相較于傳統(tǒng)的慢速冷凍法,，玻璃化冷凍法因其更高的解凍存活率和妊娠成功率而逐漸成為主流技術(shù),。玻璃化冷凍法的基本原理是將含有生物樣本的溶液在極短的時(shí)間內(nèi)（如幾分鐘內(nèi)）冷卻至液氮溫度，使溶液在凝固點(diǎn)以下形成無冰晶的半固體或固體狀態(tài),。這種方法避免了冰晶形成對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞,，從而減少了冷凍損傷。在卵母細(xì)胞冷凍保存中，玻璃化冷凍法通過優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的濃度和冷凍速率,，使卵母細(xì)胞在冷凍過程中保持其結(jié)構(gòu)的完整性,。紡錘體形成和功能的調(diào)控涉及多個(gè)信號通路。

近年來,，隨著玻璃化冷凍技術(shù)的不斷發(fā)展,，成熟卵母細(xì)胞紡錘體的冷凍保存研究取得了進(jìn)展。研究表明,，采用玻璃化冷凍法冷凍保存的成熟卵母細(xì)胞,，在解凍后其紡錘體和染色體的形態(tài)及功能均能得到較好的保持。這主要得益于玻璃化冷凍過程中避免了冰晶形成對細(xì)胞的損傷,，以及冷凍保護(hù)劑對細(xì)胞的有效保護(hù),。然而，值得注意的是,，盡管玻璃化冷凍法在提高解凍存活率和妊娠成功率方面取得了成效,，但仍存在一些問題。例如,，冷凍過程中紡錘體的微管結(jié)構(gòu)可能受到低溫的影響而發(fā)生解聚,，導(dǎo)致染色體分離異常。此外,，冷凍保護(hù)劑的毒性也可能對卵母細(xì)胞造成一定的損傷,。為了克服這些問題，研究者們進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)和優(yōu)化工作,。例如,，通過改進(jìn)冷凍保護(hù)劑的配方和濃度，降低其對細(xì)胞的毒性,；通過優(yōu)化冷凍速率和程序,，減少冷凍過程中對細(xì)胞的機(jī)械損傷；以及通過篩選和評估不同冷凍載體和保存時(shí)間對卵母細(xì)胞冷凍效果的影響,，尋找好的冷凍保存條件,。紡錘體微管的正極朝向細(xì)胞兩極，負(fù)極則靠近染色體,。美國核移植紡錘體Oosight Basic

紡錘體在細(xì)胞分裂完成后迅速解體,，為細(xì)胞質(zhì)分裂提供空間。深圳卵母細(xì)胞紡錘體玻璃底培養(yǎng)皿

為了減少冷凍過程中紡錘體的損傷,，研究者們嘗試在冷凍液及解凍液中添加細(xì)胞骨架保護(hù)劑,，如紫杉醇（Taxol）。紫杉醇能夠穩(wěn)定微管結(jié)構(gòu),，防止其在低溫下解聚,。通過偏光成像技術(shù),，研究者可以實(shí)時(shí)監(jiān)測紫杉醇對紡錘體的保護(hù)效果，評估其在冷凍保存過程中的作用機(jī)制,。此外,，還可以進(jìn)一步觀察解凍后卵母細(xì)胞的發(fā)育潛能，為臨床應(yīng)用提供可靠依據(jù),。無需對細(xì)胞進(jìn)行固定和染色,，保持細(xì)胞的活性與完整性。能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測紡錘體的形態(tài)變化,，評估冷凍效果,。能夠捕捉到細(xì)微的紡錘體形態(tài)變化，提高評估的準(zhǔn)確性,。深圳卵母細(xì)胞紡錘體玻璃底培養(yǎng)皿