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冷凍與解凍過(guò)程中涉及多個(gè)環(huán)節(jié),,包括溫度控制、時(shí)間控制,、冷凍保護(hù)劑的添加與去除等,。這些環(huán)節(jié)中的任何一步操作不當(dāng)都可能導(dǎo)致紡錘體損傷。因此,,需要不斷優(yōu)化冷凍與解凍技術(shù),,以減少對(duì)紡錘體的不良影響。近年來(lái),,研究者們通過(guò)不斷嘗試和優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方,,取得了進(jìn)展。例如,,甘油,、二甲基亞砜(DMSO)等滲透性保護(hù)劑被用于哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的冷凍保存中,它們能夠迅速降低細(xì)胞內(nèi)水分含量,,減少冰晶形成,。同時(shí),一些非滲透性保護(hù)劑如蔗糖,、海藻糖等也被發(fā)現(xiàn)對(duì)紡錘體具有一定的保護(hù)作用,。紡錘體的異??赡軐?dǎo)致染色體無(wú)法正確分離,,形成多倍體或單倍體細(xì)胞。深圳Hamilton Thorne紡錘體胚胎發(fā)育
在生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,,卵母細(xì)胞的冷凍保存技術(shù)一直是研究的熱點(diǎn)之一,,旨在提高女性生育能力的保存與利用。然而,,傳統(tǒng)紡錘體觀察方法往往需要對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行固定和染色,,這不僅破壞了細(xì)胞的活性,還限制了對(duì)其發(fā)育潛能的進(jìn)一步評(píng)估,。傳統(tǒng)紡錘體觀察方法,,如免疫熒光染色技術(shù),雖然能夠清晰地展示紡錘體的形態(tài),,但其缺點(diǎn)在于需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定和染色處理,,這一過(guò)程不可避免地會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷,影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和臨床應(yīng)用,。而Polscope偏振光顯微成像系統(tǒng)則通過(guò)利用紡錘體微管結(jié)構(gòu)的雙折射性,,實(shí)現(xiàn)了對(duì)無(wú)需染色紡錘體的直接觀察。這一技術(shù)創(chuàng)新不僅保留了細(xì)胞的活性與完整性,還提高了觀察的實(shí)時(shí)性和動(dòng)態(tài)性,,為卵母細(xì)胞冷凍研究提供了更為準(zhǔn)確和可靠的評(píng)估手段,。上海紡錘體實(shí)時(shí)成像紡錘體卵細(xì)胞評(píng)價(jià)紡錘體微管的排列方向決定了染色體分離的方向。
紡錘體是如何形成的(2)動(dòng)粒微管連接染色體動(dòng)粒與位于兩極的中心體,。在有絲分裂前期,,一旦核被膜解聚,由相反兩個(gè)方向的中心體伸出的動(dòng)粒微管就會(huì)隨機(jī)地與染色體上的動(dòng)粒結(jié)合而俘獲染色體,,微管**終附著在動(dòng)粒上,,動(dòng)粒微管把染色體和紡錘體連接在一起。在細(xì)胞分裂期的后期,,分開后的染色單體被拉向兩極,。染色體移動(dòng)由兩個(gè)相互獨(dú)立且同步進(jìn)行的過(guò)程所介導(dǎo),分別為過(guò)程A和過(guò)程B,。在過(guò)程A中,,在連接微管和動(dòng)粒的馬達(dá)蛋白的作用下,動(dòng)粒微管解聚縮短,,在動(dòng)粒處產(chǎn)生的拉力使染色體移向兩極,。極間微管是從一個(gè)中心體伸出的某些微管與從另一個(gè)中心體伸出的微管相互作用,阻止了它們的解聚,,從而使微管結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定,,兩套微管的這種結(jié)合形成了有絲分裂紡錘體的基本框架,具有典型的兩極形態(tài),,產(chǎn)生這些微管的兩個(gè)中心體稱為紡錘極,,這些相互作用的微管被稱為極間微管。在有絲分裂后期過(guò)程B中,,極間微管的伸長(zhǎng)和相互間的滑行使紡錘極向兩極方向移動(dòng),。星體微管從中心體向周圍呈輻射狀分布,在有絲分裂后期過(guò)程B中,,每一紡錘極上向外伸展的星體微管發(fā)出向外的力,,拉動(dòng)兩個(gè)紡錘極向兩極方向移動(dòng)。
通過(guò)抑制細(xì)胞周期重新進(jìn)入,,可以減少神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡,,保護(hù)神經(jīng)元的存活。例如,,使用細(xì)胞周期抑制劑(如CDK抑制劑)可以抑制細(xì)胞周期重新進(jìn)入,,減少神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡。此外,,通過(guò)促進(jìn)神經(jīng)元的細(xì)胞周期退出,,也可以減少神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡,。通過(guò)改善線粒體功能,可以恢復(fù)能量代謝,,保護(hù)神經(jīng)元的存活,。例如,使用線粒體功能增強(qiáng)劑(如輔酶Q10)可以改善線粒體功能,,恢復(fù)能量代謝,。此外,通過(guò)減少線粒體的氧化應(yīng)激,,也可以改善線粒體功能,。紡錘體微管的動(dòng)態(tài)變化是細(xì)胞分裂周期的重要標(biāo)志。
染色體當(dāng)細(xì)胞從間期進(jìn)入有絲分裂期,,間期細(xì)胞微管網(wǎng)絡(luò)解聚為游離的αβ-微管蛋白二聚體,,再重組成紡錘體,介導(dǎo)染色體的運(yùn)動(dòng),;分裂末期紡錘體微管解聚,,又重組形成細(xì)胞質(zhì)微管網(wǎng)絡(luò)??煞譃椋簞?dòng)粒微管:連接染色體動(dòng)粒于兩極的微管,。極間微管:從兩極發(fā)出,在紡錘體中部赤道區(qū)相互交錯(cuò)的微管,。星體微管:中心體周圍呈輻射分布的微管,。染色體的運(yùn)動(dòng)依賴紡錘體微管的組裝和去組裝。在這一過(guò)程中動(dòng)粒微管與動(dòng)粒之間的滑動(dòng)主要是依靠結(jié)合在動(dòng)粒部位的驅(qū)動(dòng)蛋白和動(dòng)力蛋白沿微管的運(yùn)動(dòng)來(lái)完成,。極微管在紡錘體中部交錯(cuò),,有些分布在極微管之間特殊的雙極馬達(dá)蛋白,其中2個(gè)馬達(dá)蛋白沿一條微管運(yùn)動(dòng),,另2個(gè)馬達(dá)結(jié)構(gòu)域沿另一條微管運(yùn)動(dòng),。由于2條微管分別來(lái)自二極,,故極性相反,。當(dāng)雙極驅(qū)動(dòng)蛋白四聚體沿微管向正極運(yùn)動(dòng)時(shí),紡錘體二極間距離延長(zhǎng),。反之紡錘體距離縮短,。紡錘體微管的排列和穩(wěn)定性受到細(xì)胞骨架的支撐。北京紡錘體改善分級(jí)
紡錘體在細(xì)胞分裂中扮演關(guān)鍵角色,,確保遺傳物質(zhì)均等分配,。深圳Hamilton Thorne紡錘體胚胎發(fā)育
紡錘體觀測(cè)儀在補(bǔ)救ICSI中的應(yīng)用我們知道,成熟的卵母細(xì)胞排出***極體,。IVF加入精子后,,精子會(huì)穿透層層障礙**終進(jìn)入卵子,隨著時(shí)間的推移,卵子的紡錘體會(huì)將染色單體拉向兩極,,進(jìn)而排出第二極體,,再往后大約加精后9-16小時(shí),雌雄原核會(huì)出現(xiàn),,而原核的出現(xiàn)才是受精的標(biāo)志,。但是對(duì)于那些沒(méi)有受精的卵子,到了原核出現(xiàn)的時(shí)間窗,,發(fā)現(xiàn)沒(méi)有受精時(shí)再去補(bǔ)救ICSI,,往往錯(cuò)過(guò)了卵子的比較好受精時(shí)間,因?yàn)闆](méi)有受精的卵子會(huì)在體外老化,,即使受精,,胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以,,我們?cè)诩泳蟮?-6小時(shí),,通過(guò)觀察第二極體的排出來(lái)初步判斷是否受精,**的增加了那些受精障礙患者的受精率,,也避免了卵子的老化,。當(dāng)然,偶爾也會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤補(bǔ)救,。文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)IVF受精后的未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI補(bǔ)救,,實(shí)驗(yàn)組用紡錘體觀測(cè)儀觀察并統(tǒng)計(jì)紡錘體的數(shù)目,82.7%含有一個(gè)紡錘體,,17.3%含有兩個(gè)紡錘體,,并對(duì)含有一個(gè)紡錘體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI;而對(duì)照組并未用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體,,只對(duì)未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI,。結(jié)果發(fā)現(xiàn),使用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率,,降低多原核受精比率,。深圳Hamilton Thorne紡錘體胚胎發(fā)育