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紡錘體特殊細(xì)胞器紡錘體(SpindleApparatus),,形似紡錘,,是產(chǎn)生于細(xì)胞分裂前初期(Pre-Prophase)到末期(Telophase)的一種特殊細(xì)胞器。其主要元件包括微管(Microtubules),,附著微管的動(dòng)力分子分子馬達(dá)(Molecularmotors),以及一系列復(fù)雜的超分子結(jié)構(gòu),。一般來講,在動(dòng)物細(xì)胞中,,中心體是紡錘體的一部分,。高等植物細(xì)胞的紡錘體不含中心體。而***細(xì)胞的紡錘體含紡錘極體(SpindlePoleBody),,一般被視為中心體的同源細(xì)胞器,。紡錘體是由大量微管縱向排列組成的中部寬闊、兩級(jí)縮小的如紡錘狀的結(jié)構(gòu),。在細(xì)胞分裂中,,紡錘體對(duì)卵母細(xì)胞染色體的運(yùn)動(dòng)、平衡,、分配以及極體排出都非常重要,。卵母細(xì)胞紡錘體的異常會(huì)導(dǎo)致減數(shù)分裂異常,產(chǎn)生非整倍體的卵母細(xì)胞或者成熟阻滯的卵母細(xì)胞,。紡錘體微管的穩(wěn)定性受到細(xì)胞內(nèi)外多種信號(hào)的調(diào)節(jié),。北京紡錘體實(shí)時(shí)成像紡錘體兼容大部分顯微鏡
紡錘體觀測(cè)儀的工作原理和應(yīng)用紡錘體觀測(cè)儀利用光線經(jīng)過雙折射性的物體時(shí)產(chǎn)生的光程差,對(duì)卵母細(xì)胞內(nèi)的紡錘體進(jìn)行動(dòng)態(tài)及無創(chuàng)觀察,。通過偏振光顯微鏡,,可以觀察到紡錘體與細(xì)胞其他部分的對(duì)比,從而定位紡錘體的位置,。這種技術(shù)可以在不傷害卵子的前提下,,即時(shí)反應(yīng)細(xì)胞狀態(tài),避免在ICSI注射時(shí)損壞紡錘體?13,。紡錘體觀測(cè)儀在試管嬰兒中的應(yīng)用效果?提高受精率?:使用紡錘體觀測(cè)儀可以顯著提高受精率,。在觀察到紡錘體的卵子中,正常受精率***高于未觀察到紡錘體的卵子(83.3% VS 77.2%)?1,。?降低多原核受精比率?:使用紡錘體觀測(cè)儀可以***降低多原核受精比率,,從而提高胚胎的質(zhì)量?4。?避免紡錘體損傷?:在ICSI注射過程中,,通過定位紡錘體的位置,,可以避免對(duì)紡錘體的損傷,減少染色體異常的風(fēng)險(xiǎn)?13,。北京成熟卵母細(xì)胞紡錘體胚胎植入紡錘體微管與染色體上的動(dòng)粒結(jié)合,,形成穩(wěn)定的連接,。
在核移植過程中,紡錘體的穩(wěn)定性是首要考慮的問題,。冷凍和解凍過程中的溫度變化和冷凍保護(hù)劑的毒性都可能對(duì)紡錘體造成損傷,,導(dǎo)致染色體分離異常,進(jìn)而影響胚胎發(fā)育,。因此,如何在冷凍過程中保持紡錘體的穩(wěn)定性,,是核移植紡錘體卵冷凍研究面臨的重要挑戰(zhàn),。體細(xì)胞核在移入去核卵母細(xì)胞后,需要經(jīng)歷復(fù)雜的重新編程過程,,以獲得全能性,。然而,這一過程受到多種因素的調(diào)控,,包括表觀遺傳修飾,、轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)等。在冷凍過程中,,這些調(diào)控機(jī)制可能受到干擾,,導(dǎo)致重新編程失敗或異常,從而影響胚胎發(fā)育,。
紡錘體觀測(cè)儀在補(bǔ)救ICSI中的應(yīng)用我們知道,,成熟的卵母細(xì)胞排出***極體。IVF加入精子后,,精子會(huì)穿透層層障礙**終進(jìn)入卵子,,隨著時(shí)間的推移,卵子的紡錘體會(huì)將染色單體拉向兩極,,進(jìn)而排出第二極體,,再往后大約加精后9-16小時(shí),雌雄原核會(huì)出現(xiàn),,而原核的出現(xiàn)才是受精的標(biāo)志,。但是對(duì)于那些沒有受精的卵子,到了原核出現(xiàn)的時(shí)間窗,,發(fā)現(xiàn)沒有受精時(shí)再去補(bǔ)救ICSI,,往往錯(cuò)過了卵子的比較好受精時(shí)間,因?yàn)闆]有受精的卵子會(huì)在體外老化,,即使受精,,胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以,,我們?cè)诩泳蟮?-6小時(shí),,通過觀察第二極體的排出來初步判斷是否受精,,**的增加了那些受精障礙患者的受精率,也避免了卵子的老化,。當(dāng)然,,偶爾也會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤補(bǔ)救。文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)IVF受精后的未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI補(bǔ)救,,實(shí)驗(yàn)組用紡錘體觀測(cè)儀觀察并統(tǒng)計(jì)紡錘體的數(shù)目,,82.7%含有一個(gè)紡錘體,17.3%含有兩個(gè)紡錘體,,并對(duì)含有一個(gè)紡錘體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI,;而對(duì)照組并未用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體,只對(duì)未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI,。結(jié)果發(fā)現(xiàn),,使用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率,降低多原核受精比率,。紡錘體形成過程中的任何錯(cuò)誤都可能影響細(xì)胞的命運(yùn),。
微管蛋白的突變和異常磷酸化是導(dǎo)致紡錘體功能障礙的主要原因之一。微管蛋白是構(gòu)成微管的基本單元,,其穩(wěn)定性和功能對(duì)于紡錘體的組裝和染色體的分離至關(guān)重要,。微管蛋白的突變和異常磷酸化會(huì)影響微管的動(dòng)態(tài)平衡,導(dǎo)致紡錘體的組裝異常和染色體分離錯(cuò)誤,。紡錘體功能障礙會(huì)導(dǎo)致染色體不穩(wěn)定,,增加基因組的不穩(wěn)定性。染色體不穩(wěn)定會(huì)影響基因的表達(dá)和功能,,導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂和細(xì)胞凋亡,。在神經(jīng)退行性疾病中,染色體不穩(wěn)定會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)元的基因表達(dá)異常,,進(jìn)一步加劇神經(jīng)元的損傷和死亡,。 紡錘體微管的數(shù)量和分布隨細(xì)胞分裂階段而變化。武漢紡錘體廠家
紡錘體的異常會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分裂錯(cuò)誤,,進(jìn)而引發(fā)染色體不穩(wěn)定性和遺傳性疾病,。北京紡錘體實(shí)時(shí)成像紡錘體兼容大部分顯微鏡
玻璃化冷凍技術(shù)因其快速冷凍和解凍的特點(diǎn),在哺乳動(dòng)物紡錘體卵冷凍保存中展現(xiàn)出巨大優(yōu)勢(shì),。該技術(shù)通過極快的降溫速率和高濃度的冷凍保護(hù)劑,,使細(xì)胞內(nèi)溶液在冷凍過程中呈玻璃態(tài)而非結(jié)晶態(tài),從而避免了冰晶對(duì)紡錘體的損傷,。此外,,研究者們還嘗試將微流控技術(shù)、激光輔助冷凍等新技術(shù)應(yīng)用于卵母細(xì)胞的冷凍保存中,,以進(jìn)一步提高冷凍效果,。為了準(zhǔn)確評(píng)估冷凍對(duì)紡錘體的影響,,研究者們開發(fā)了多種紡錘體穩(wěn)定性評(píng)估技術(shù)。例如,,通過偏光顯微鏡觀察紡錘體的形態(tài)變化,;利用免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)紡錘體相關(guān)蛋白的分布和表達(dá);以及通過分子生物學(xué)方法檢測(cè)紡錘體相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平等,。這些技術(shù)的應(yīng)用為深入研究冷凍過程中紡錘體的變化提供了有力支持,。北京紡錘體實(shí)時(shí)成像紡錘體兼容大部分顯微鏡