人類精子冷凍保存和儲存：增加了冷凍樣本的安全性,、精液冷凍保存方案,、快速液氮熏蒸冷凍、冷凍精液的解凍,、玻璃化冷凍等內(nèi)容，更具可操作性,。本手冊對人類精子的冷凍保存提出了具體建議：將樣本分管分罐分開儲存,；對使用的材料和留存標本建立定期核驗程序；所有儲罐都應有液位監(jiān)控報警系統(tǒng),，以監(jiān)測溫度和液氮液位,，傳感器應連接警報器,，可通過實驗室人員的終端進行提醒。新證據(jù)表明,，玻璃化冷凍是冷凍保存精液的一種有價值的方法,。該方法的原理是將小體積樣本與無污染液氮直接接觸并快速冷凍，可以防止冰晶的形成,，并減少精子的滲透性損傷,。在麥管玻璃化冷凍(無菌玻璃化冷凍)中，也可以使用封閉系統(tǒng),，不需要無菌的液氮,。CASA系統(tǒng)操作簡便，檢測速度快,，且重復性優(yōu)于人工檢測,。北京狗精子分析BCF

通過比較進行質(zhì)量評估1．室內(nèi)比較是采用同一個標本在同一參數(shù)下?經(jīng)CASA多次測定后?應用適當?shù)慕y(tǒng)計學方法對測得數(shù)值進行比較。在男科實驗室中對CASA系統(tǒng)的質(zhì)量控制通常使用影像磁帶或完全相同的凍存**標本進行日間比較,。當室內(nèi)比較作為結(jié)果質(zhì)量的一種評估時?計算機中數(shù)值的在線獲得是極具優(yōu)勢的,。2．室間比較要求標本向其他幾個實驗室運送文獻中的一些報道闡述了該方面的經(jīng)驗但是運動精子是不能在不受限制的條件下運輸?shù)膶⑵渲糜谝旱羞\送需進一步考慮更多的因素（解凍技術、標本的處理等）這些因素會影響活動力參數(shù),；到目前為止室間比較的研究還未見滿意報道,；Jorgensen等進行了研究嘗試克服實驗室間運送解凍標本的困難其研究方式是：邀請四個實驗室的實驗人員攜帶各自的儀器到同一個地點以各自通常采用的實驗方法進行精子評估但未見明確的結(jié)論。3．對于精子活力測定CASA系統(tǒng)的測定與直觀評估的比較有文獻進行了報道但結(jié)果并不相同,。認為直觀評估揭示標準數(shù)值且其差異是由CASA系統(tǒng)的錯誤引起的該觀點是不正確的,；無論從理論上還是實踐中CASA數(shù)值比直觀評估所獲得的數(shù)值更接近于真值；對直線前進的精子比例而言這一點是非常正確的,。北京計數(shù)精子分析W.H.O 4計算機輔助精子分析（computer- assisted sperm analysis）是2014年公布的泌尿外科學名詞,。

美國HamiltonThorne的TOXIVOS精子分析儀已經(jīng)被FDA和國內(nèi)外毒理學實驗室所使用。本試驗研究目的對精子分析儀和血細胞計數(shù)板在大鼠附睪精子計數(shù)結(jié)果的比較驗證,。方法選取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,對三批次雄鼠的精子計數(shù)進行比較,。健康雄鼠通過戊巴比妥鈉麻醉實施安樂死后,取左側(cè)附睪尾稱重,將附睪尾部放入37℃預熱的含有M199培養(yǎng)液平皿中,剪碎附睪尾,放入培養(yǎng)箱中37℃孵育5min,然后吸取1份精子懸液,用M199培養(yǎng)液進行一定倍數(shù)的稀釋,混勻后,取1滴稀釋液,滴入精子分析儀**載玻片上,將載玻片放入TOXIVOS精子分析儀載物臺,進行精子計數(shù),同時吸取稀釋后的精子懸液滴入血細胞計數(shù)板內(nèi),通過光學顯微鏡進行計數(shù),比較兩種計數(shù)方法的差異性。結(jié)果***批次雄鼠精子分析儀和血細胞計數(shù)器的精子計數(shù)結(jié)果分別為70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析儀和血細胞計數(shù)器的精子計數(shù)結(jié)果分別為128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析儀和血細胞計數(shù)器的精子計數(shù)結(jié)果分別為165.9±91.7,140.0±59.6,。三個批次的精子分析儀和血細胞計數(shù)板的精子計數(shù)結(jié)果無統(tǒng)計學差異(P>0.05),。結(jié)論精子分析儀是一種方便、可靠,、快速,、高效的研究工具,在生殖毒理學研究中具有重要的應用價值。

精液顯微鏡檢查(1)精子存活率：排精后30～60分鐘,，正常精子存活率應為80%～90%,，精子存活率降低是導致不育的重要原因。(2)精子活動力：指精子活動狀態(tài),，也是指活動精子的質(zhì)量,。世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦將精子活動力分為4級：①精子活動好,，運動迅速，活潑有力,，直線向前運動,；②精子活動較好，運動速度尚可,，游動方向不定,，呈直線或非直線運動，帶有回旋,；③精子運動不良,，運動遲緩，原地打轉(zhuǎn)或抖動,，向前運動能力差,；④死精子，精子完全不活動,。正常精子活動力應在③級以上,，若＞40%的精子活動不良(③、④)級,，常是導致男性不育的重要原因,。精子活動力低，主要見于精索靜脈曲張,、泌尿生殖系統(tǒng)非特異性***,，應用某些藥物如抗瘧藥、雄***等所致,。Hamilton Thorne精子分析儀具有良好的數(shù)據(jù)管理和報告生成功能,，能夠方便用戶查閱和分享分析結(jié)果。

擴展性檢查：可以在某些情況下由實驗室選擇或根據(jù)臨床醫(yī)生的特殊要求而使用的項目,。手冊增加了精子DNA損傷,、遺傳學和炎癥細胞等相關檢查項目。提出了基因突變是導致不育和精液常規(guī)檢查異常的原因,。新增了精液相關細胞因子、趨化因子等檢測的方法,、試劑,、檢測步驟等內(nèi)容。在精液參數(shù)異常的男性中普遍存在精子DNA損傷,，并且已有報道指出其與精液參數(shù)正常男性的不育有關,。由于與精液質(zhì)量相關，精子DNA損傷檢測是男性不育檢查中的重要補充內(nèi)容,，已成為男科學基礎和臨床中論述**多,、**有前景的精子損傷分子標志物之一,。本版手冊增加了大量篇幅對其原理和檢測方法進行了描述。新增了基因和基因組測序內(nèi)容,。臨床上,，越來越多的人意識到染色體異常[數(shù)量異常、結(jié)構(gòu)異常(包括微缺失和微重復)]和基因突變是導致各種男性不育癥的基礎病因,，而這正是在精液分析中觀察到的許多異常的原因,。盡管基因和基因組測序常規(guī)在醫(yī)學遺傳學實驗室進行，但一些男科實驗室也在做同樣的檢測,。為明確生殖道炎癥對于男性不育的影響,，泌尿男科醫(yī)生可能提出對精液中的趨化因子和細胞因子進行評估。本手冊納入了精液中白細胞介素檢測方法,。男性精液檢測主要依賴計算機輔助精子分析儀(computer assistant semen analyses,，CASA)。香港瀕危物種精子分析精子動力分析

?HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數(shù),，前向性（STR）?：平均路徑的直線性,。北京狗精子分析BCF

CASA系統(tǒng)也可用于精子形態(tài)學評估。CASA系統(tǒng)可用來定量分析精子頭部形態(tài)學,、中段甚至主段的形態(tài),，可以把精子頭部和中段分類為正常或者不正常,，還可以給出頭部和中段尺度,、頭部橢圓率和勻稱性的均數(shù)、標準差和中位數(shù),，以及對染色的精子頂體區(qū)進行測量[3],。與人工操作相比，自動化系統(tǒng)更具客觀性,，精確度和重復性的潛力[4],。精確度和重復性不低于7%[5]，這優(yōu)于有經(jīng)驗的技術人員的手工評估,。兩個研究已經(jīng)提示在CASA結(jié)果與生育力之間存在***聯(lián)系,。Coetzee等發(fā)現(xiàn)自動分析的正常精子形態(tài)的結(jié)果是預示體外受精率和妊娠率的有意義指標[6]。Garrett等發(fā)現(xiàn)**中能與透明帶結(jié)合的,、具有某些頭部形態(tài)特征的精子所占的百分比（Z%）,，和直線速度（VSL）的精子的百分比，與大樣本的低生育力夫婦的自然妊娠率是有***且**的關系,。Z%和VSL與生育力間的關系顯示是連續(xù)的,，而且沒有顯示臨界值；高于臨界值,，妊娠率也不會進一步增加[7],。北京狗精子分析BCF