1.細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液,、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基,、無血清細胞培養(yǎng)基,、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,,BSS)BSS主要是由無機鹽,、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng),。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等,。幾種常用的BSS配方如下(表1-1),。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液,。因為Ca2+,、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,參與細胞粘附等功能,,使用不含Ca2+,、Mg2+的BSS可避免細胞結團。此外,,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎溶液,,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng),;后者緩沖能力較強,,適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿,、血清,、雞胚浸出液等。其優(yōu)點是營養(yǎng)成分豐富,,培養(yǎng)效果良好,,但缺點是成分復雜,來源受限且制作過程復雜,、批間差異大,。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液,、促進細胞貼壁的膠原類物質在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少,。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。MCDB 131培養(yǎng)基不同于傳統(tǒng)培養(yǎng)基之處在于,,其含有微量元素,、腐胺、腺嘌呤及更高濃度的氨基酸和維生素,。遼寧RPMI-1640細胞培養(yǎng)基廠家
在細胞培養(yǎng)實踐中,,選擇合適的 DMEM 培養(yǎng)基至關重要。對于生長較快,、粘附性低的細胞,,如某些腫瘤細胞和雜交瘤細胞,高糖型 DMEM 培養(yǎng)基是理想之選,,其高濃度葡萄糖能充分滿足這類細胞對能量的高需求,,促進細胞快速生長。而對于一些原代細胞,,因其對培養(yǎng)環(huán)境更為敏感,可能需要低糖型 DMEM 培養(yǎng)基,,并根據(jù)細胞來源和特性添加特定的生長因子,、營養(yǎng)補充劑等,定制專屬培養(yǎng)方案,,為原代細胞提供**適宜的生長條件,,提高原代細胞培養(yǎng)的成功率。吉林細胞培養(yǎng)基全國發(fā)貨即開即用液體配方,,DMEM/F12節(jié)省配制時間,,提升實驗效率。
Ham’sF-12K培養(yǎng)基是Ham’sF-12營養(yǎng)混合物的Kaighn’s改進型,,在Ham’sF-12的基礎上提高了氨基酸和**酸的濃度,,降低了葡萄糖的用量,并修改了鹽的成分和含量(Konigsbergs)。Ham’sF-12K培養(yǎng)基**初設計用于培養(yǎng)原代人肝細胞以及分化的大鼠和雞的細胞,。針對***的細胞培養(yǎng)應用,,我們提供多種組分的Ham’sF-12K改良培養(yǎng)基。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑,,用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度,,在低PH值時酚紅使培養(yǎng)液呈黃色,而較高的PH值時使培養(yǎng)液呈紫色,,PH值~,,**適合細胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點,,研究表明酚紅可以模擬固醇類***(特別是雌***)的作用,,因此在用到雌***敏感的細胞時(如乳腺組織),比較好使用不含酚紅的培養(yǎng)基,。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測,。此外,一些無血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡,。青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”,,是體外培養(yǎng)中為預防微生物污染**常用的***,其中,,青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成,,對革蘭陽性菌特別有效;而鏈霉素能夠與細菌核糖體30S亞單位結合,,抑制細菌蛋白質的合成,,對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效,但對革蘭氏陰性菌特別有效,。青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用可以預防絕大部分的細菌污染,。
RPMI-1640細胞培養(yǎng)基RPMI-1640是Moore等人于1967年在美國紐約州法羅市的羅斯韋爾公園紀念研究所(RoswellParkMemorialInstitute,RPMI)開發(fā)出來的,RPMI是該研究所開發(fā)的一類細胞培養(yǎng)基,,1640是培養(yǎng)基代號,。RPMI-1640是改進型的McCoy‘s5A培養(yǎng)基,使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng),,與大多數(shù)哺乳動物細胞培養(yǎng)基不同的是其典型的PH8的配方,。RPMI-1640培養(yǎng)基常用初是為淋巴細胞培養(yǎng)專門設計的,現(xiàn)在已廣泛應用于各種正常細胞和ai細胞的培養(yǎng),,包括HeLa細胞,、Jurkat細胞、MCF-7細胞,、PC12細胞,、PBMC細胞,、星形膠質細胞和ai細胞,是使用常用為比較多的培養(yǎng)基之一,。RPMIRPMI1640培養(yǎng)基相比其他培養(yǎng)基之所以具有獨特的效果,,是因為其中含有還原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素。RPMI1640培養(yǎng)基含有生物素,、維生素B12以及PABA,,這些成分是Eagle’sMEM和DMEM所不具備的。針對細胞培養(yǎng)應用,,我們提供多種組分的RPMI1640改良培養(yǎng)基,。Dulbecco’s 改良培養(yǎng)基–DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)現(xiàn)已廣應用于各種細胞的培養(yǎng)。
RPMI-1640細胞培養(yǎng)基RPMI-1640是Moore等人于1967年在美國紐約州法羅市的羅斯韋爾公園紀念研究所(RoswellParkMemorialInstitute,RPMI)開發(fā)出來的,,RPMI是該研究所開發(fā)的一類細胞培養(yǎng)基,,1640是培養(yǎng)基代號。
我們提供多種組分的RPMI1640改良培養(yǎng)基,。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基L-谷氨酰胺(Glutamine)是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素,,但其在溶液中不穩(wěn)定,會自發(fā)降解,,不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基,,可以根據(jù)研究需要任意調整L-谷氨酰胺的用量,在使用時添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細胞的生長,。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,。Alanyl-glutamine,Ala-Glu),,又名丙氨酰谷氨酰胺,、丙谷二肽,是一種高級細胞培養(yǎng)添加劑,,可直接替代細胞培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺,。L-谷氨酰胺(Glutamine)是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)素,但其在溶液中不穩(wěn)定,,會自發(fā)降解生成氨和焦谷氨酸,,其中氨對細胞有害;而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中十分的穩(wěn)定,,不會自發(fā)的降解。細胞利用其機制是:在細胞培養(yǎng)時,,細胞會逐漸向培養(yǎng)液中釋放一種肽酶,,將L-丙氨酰-L-谷氨酰水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺,而后細胞會將這兩種水解產(chǎn)物吸收利用,。 DMEM培養(yǎng)基**初設計葡萄糖含量為1000mg/L(低糖型),,后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L(高糖型),。浙江醫(yī)療細胞培養(yǎng)基廠家
Fischer’s培養(yǎng)基不含蛋白質、脂類或任何生長因子,,故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用,。遼寧RPMI-1640細胞培養(yǎng)基廠家
其本質為含有鹽、氨基酸,、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物,。在此基礎上,DMEM,、IMDM,、HAMF12、PRMI1640等各種合成細胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來,。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細介紹,。MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型,也有含Hanks'平衡鹽的類型,;有高壓滅菌型的,,也有過濾除菌型的;還有含非必需氨基酸的類型,。是基本,、適用范圍廣的細胞培養(yǎng)基。DMEM細胞培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎上改良獲得的,,各成分份量加倍,,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型,。細胞生長快,。附著稍差的腫瘤細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,,常用于雜交瘤的骨髓瘤細胞和DNA轉染的轉化細胞培養(yǎng),。IMDM細胞培養(yǎng)基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基礎上改良,增加了幾種氨基酸和胱氨酸量等,??捎糜陔s交瘤細胞培養(yǎng),以及無血清培養(yǎng)的基礎細胞培養(yǎng)基,。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基專門針對淋巴細胞培養(yǎng)設計,,含有BSS、21種氨基酸,、維生素等,,適于多種正常細胞和腫瘤細胞的培養(yǎng),也用做懸浮細胞培養(yǎng),。HamF12細胞培養(yǎng)基含微量元素,。遼寧RPMI-1640細胞培養(yǎng)基廠家
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